DB15T 1610-2019黄花矶松组织培养技术规程.pdfVIP

ICS 65.020.20 B 05 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1610—2019 黄花矶松组织培养技术规程 Technical regulation of tissue culture of limonium aureum 2019-03-15 发布 2019-06-15 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 目 次 前言 Ⅱ 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 实验室要求与设施 1 4 培养基的制备 1 5 组织培养过程 2 附录A （资料性附录） B5 基础培养基成分 4 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由内蒙古蒙草生态环境（集团）股份有限公司提出。 本标准由内蒙古自治区草原生态修复标准化技术委员会(SAM/TC34)归口。 本标准起草单位：内蒙古蒙草生态环境（集团）股份有限公司。 本标准主要起草人：高秀梅、田志来、马怀林、张永清、李晶晶、白俊梅、崔海鹏、刘思泱。 黄花矶松组织培养技术规程 1 范围 本标准规定了黄花矶松组织培养中的实验室要求与设施、培养基的制备和组织培养过程。 本标准适用于内蒙古地区黄花矶松组培苗的规模化育苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 NY/T 2306-2013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 实验室要求与设施 实验室设计与设施按照NY/T 2036-2013，4.1.3 执行。 4 培养基的制备 4.1 培养基的配制 B5 培养基母液的配制顺序参见附录A，配制使用蒸馏水。大量元素按照比使用浓度高10～100倍进 行配制，微量元素按照比使用浓度高20～1000 倍进行配制，作为贮备液。 4.2 植物生长调节剂母液的配制 4.2.1 配制 植物生长调节剂母液的配制浓度为KT 0.2 mg/L～0.8 mg/L、NAA 0.05 mg/L～0.1 mg/L、2,4-D 0.02 mg/L～0.08 mg/L、IBA 0.1 mg/L。 4.2.2 保存 配制好的母液贴上标签，注明名称和日期，保存于约4 ℃冰箱中，尽快使用。 4.2.3 其他物质 用3 g/L～5 g/L 卡拉胶作固化剂，25 g/L～35 g/L 的食用白糖代替蔗糖作为碳源。 4.3 培养基的制作 4.3.1 母液配制 烧杯中加入3 g/L～5 g/L卡拉胶，25 g/L～35 g/L的食用白糖，按照附录A依次取大量元素、微量 元素、铁盐、有机成分，根据生长要求加入植物生长调节剂（不耐高温的药品，应在培养基灭菌后再过 滤灭菌加入），贴上标签，注明名称和日期，保存于4 ℃冰箱中，尽快使用。 4.3.2 定容 取出母液，用玻璃棒搅拌混匀，加入沸腾的自来水并不断搅拌使卡拉胶和糖溶解，加水至容器刻度 （1 L 或10 L）。 4.3.3 pH 调试 定容后用0.1 mol/L 的HCl 或NaOH 溶液，调节pH 为5.8～6.0。配置溶液方法按照GB/T 603 执行。 4.3.4 分装 将调节好的培养基根据不同需求进行分装，诱导培养基规格为容量300 ml 的培养瓶，每瓶分装40 ml～50 ml；增殖培养基规格为容量300 ml 的培养瓶，每瓶分装40 ml～50 ml；生根培养基，每瓶分 装30 ml～40 ml。 4.3.5 封口 分装好的培养瓶用封口膜或者瓶盖进行封口，并用绳子扎紧或拧紧。 4.3.6 灭菌 将封口后的培养瓶在121 ℃中灭菌20 min～25 min。 4