环保用酶制剂的生产与应用.PPTVIP

环保用酶 一、固定化酶什么是固定化酶？ 水溶性酶 水不溶性载体 水不溶性酶 （固定化酶） 固定化技术 二． 固定化酶的优缺点 多次使用 可以装塔连续反应 优点： 纯化简单 提高产物质量 应用范围广 缺点： 首次投入成本高 大分子底物较困难 用于固定化的酶，起初采用的都是经提取和分离纯化后的酶。 随着固定化技术的发展，也可采用含酶菌体或菌体碎片进行固定化，称为固定化菌体或固定化死细胞。 1973年，日本首次成功应用固定化大肠杆菌菌体中的天门冬氨酸酶，由反丁烯二酸连续生产L-天门冬氨酸。 固定化酶的方法 （一）三大类方法： 吸附法 结合法 包埋法 酶和细胞固定化示意图 （1） 吸附法 1、物理吸附：利用各种固体吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上。  常用载体： 无机载体：氧化铝、活性碳、皂土、硅藻土、金属氧化物、硅胶。一般吸附量1mg蛋白/克吸附剂 有机载体：淀粉、白蛋白等。一般吸附量几十毫克蛋白/克吸附剂 研究热点：大孔型合成树脂、陶瓷 优点： 吸附法制备固定化酶或细胞，操作简便，条件温和，不会引起酶变性失活载体廉价易得，而且可反复使用。 缺点： 靠物理吸附作用，结合力较弱，酶与载体结合不牢而容易脱落。 （2）结合法 1 离子键结合法 2 共价键结合法☆ 1 离子键结合法 概念 常用载体:二乙氨乙基纤维素 ，二乙氨乙基葡聚糖凝胶 只需在一定pH值、温度和离子强度等条件下，将酶液与载体混合搅拌几个小时，或将酶液缓慢地流过处理好的离子交换柱，就可使酶结合在离子交换剂上，制备得到固定化酶。 缺点： 离子键结合力较弱，酶与载体不牢固； 在pH和离子强度等条件改变时，酶容易脱落。所以，用此种酶时，要严格控制好pH、离子强度和温度等操作条件 2 共价键结合法 （1）概念 通过共价键将酶与载体结合的固定化方法。 （2）常用载体：天然高分子、人工合成的高聚物、无机载体 （3）可以形成共价键的基团： 游离氨基， 游离羧 基， 巯基， 咪唑基， 酚基， 羟基， 甲硫基， 吲哚基，二硫键 要使载体与酶形成共价键，必须首先使载体活化，即借助于某种方法，在载体上引进某一活泼基团。然后此活泼基团再与酶分子上的某一基团反应，形成共价键。 常用活化方法有： 重氮法、溴化氢法等。 A．重氮法 反应示意式如下（该方法需要载体具有芳香族氨基） Tyr——酪氨酸 B ．溴化氰法 本方法主要用溴化氰（CNBr）活化多糖类物质。如纤维素、葡聚糖、琼脂糖等. （3） 包埋法 包埋法分为网格型和微囊型 1．网格型 2．微囊型 1．网格型 (1) 概念 将酶或含酶菌体包埋在凝胶细微网格中，制成一定形状的固定化酶，称为网格型包埋法。也称为凝胶包埋法 常用的凝胶有琼脂凝胶、海藻酸钙凝胶、明胶等天然凝胶以及聚丙烯酰胺凝胶、光交联树脂等合成凝胶。 天然凝胶在包埋时条件温和，操作简便，对酶活性影响少，但强度较差； 合成凝胶虽强度高，对温度、pH变化的耐受性强，但需在一定的条件下进行聚合反应，才能把酶包埋起来，易引起酶失活变性，应控制好包埋条件。 2．微囊型包埋法 是将酶包埋在各种高分子聚合物制成的小球内，制成固定化酶。由于固定化形成的酶小球直径一般只有几微米至几百微米，所以也称为微囊化法。 仅适用于底物和产物都是小分子物质的酶的固定化。 各类固定化方法的特点比较: 比较项目 吸附法 结合法 包埋法 物理吸附 共价键结合 离子键结合 制备难易 易　 难 易 较难 固定化程度 弱　 强 中等 强 活力回收率 较高　 低 高 高 载体再生 可能　 不可能 可能 不可能 费用 低　 高 低 低 底物专一性 不变　 可变 不变 不变 适用性 酶源多 较广 广泛 小分子底物、药用酶 如何选择固定化方法？ 必须对酶的性质有所了解，根据实际条件和要求，选择适当方法。 ① 酶的稳定性（热、pH、对某些化学试剂的敏感性）； ② 活性中心和必需基团的性质； ③ 酶的抑制剂和激活剂； ④ 载体的来源、价格、机械性能、载体的功能基团和交联度等。 （二）固定化酶反应条件的变化 酶经固定化后，其催化反应特征会发生变化，具体表现在以下几个方面： 1、酶活力回收率变化 ——固定化酶所保留下来的酶的活力与游离酶在固定化之前的酶活力之比，也叫残存活力等。 固定化后，酶活力往往下降。 2、底物专一性变化 对于作用与大分子底物的酶，当其固定化于水不溶性载体之后，往往由于空间障碍，而使酶对分子质量大的底物的催化活大大下降