大肠系统表达及纯化操作指南.docx

大肠系统小量表达蛋白的操作指南 1，第一天 9：00：挑一个单克隆到 1.5ml LB〔K+〕液体培育基中〔试管中〕，37℃， 200rpm 培育。 2，培育至 OD=0.6~0.8，IPTG 诱导〔3ulIPTG/支试管〕，37℃，200rpm 培育 2h。 3，收菌：取5 只 1.5ml 的 EP 管，每管参加 1ml 菌液，13000rpm，离心 1min，取 1 管弃上清，沉淀用30~100ul 10mM Tris-HCl〔pH8.0〕溶液吹散〔参加缓冲液的量视菌体量而定〕，参加与缓冲液等体积的 2×溴酚蓝 Buffer，100℃煮 5min，电泳。另 4 支管的沉淀，共用 400ul