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本发明提供一种基于反向PCR技术检测CRISPR‑Cas9位点特异性的方法。所述基于反向PCR技术检测CRISPR‑Cas9位点特异性的方法包括以下步骤：S1：sgRNA制备，首先将两条互补链退火并延伸，生成通用sgRNA框架模板，然后通过融合PCR，将20bp与目标DNA互补的特异性序列加入到通用sgRNA框架模板中，其次，通过融合PCR，将T7启动子序列加入上一步的扩增产物中，最后，通过体外转录合成sgRNAs。本发明提供的基于反向PCR技术检测CRISPR‑Cas9位点特异性的方法具有对D
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 112553311 A
(43)申请公布日 2021.03.26
(21)申请号 202011476470.7
(22)申请日 2020.12.14
(71)申请人 河南省人民医院
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