DB21_T 3006-2018牛细管冷冻精液制作与贮存技术规程.pdfVIP

ICS 65.020.30 B 43 备案号：61300-2019 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3006—2018 牛细管冷冻精液制作与贮存技术规程 Technical regulation on the production and storage of bovine straw frozen semen DB21/T 3006—2018 牛细管冷冻精液制作与贮存技术规程 1 范围 本标准规定了牛细管冷冻精液 （以下简称冻精）制作与贮存过程中的术语和定义、主要器材、器材 清洗和消毒、稀释液配制、精液品质检查、精液稀释、灌装与平衡、精液冷冻、冻精检查、冻精包装和 冻精贮存的技术内容。 本标准适用于牛细管冻精的制作与贮存。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4143－2008 牛冷冻精液 GB/T 30396－2013 牛冷冻精液包装、标签、贮存和运输 NY/T 1234－2006 牛冷冻精液生产技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 精液稀释 semen d ilution 向精液中添加一定数量按特定配方配制的适宜于精子存活并保持受精能力的溶液。 3.2 一次稀释法 one time dilution method 将采出的精液用含甘油的同温稀释液按比例要求一次加入。 3.3 二次稀释法 two dilution method 常温下第一次添加无甘油稀释液，降温平衡后、冷冻前添加等温含甘油稀释液。 3.4 降温平衡 cooling balance 稀释后的精液置于4℃的环境中，经1h～1.5h降温至4℃，在此温度下保持2h～4h。 3.5 1 DB21/T 3006—2018 上架 shelves 将细管精液沿同一方向均匀地摆放在托架上。 3.6 初冻温度 Initial freezing temperature 精液冷冻前，冷冻容器中精液所在层面的温度。 4 主要器材 相差显微镜、恒温板、密度仪、低温柜、罐装机、全自动冷冻仪、简易冷冻箱、数显测温仪、水浴 锅、恒温箱、干燥箱、无菌箱、标签打印机、液氮罐、移液器、托架、搓板、细管剪、镊子、液氮、包 装袋、标签、拇指管、细管、烧杯、量筒、载玻片、盖玻片等。 5 器材清洗和消毒 5.1 玻璃器皿 使用后或新购置的玻璃器皿，如集精管、烧杯、量筒、平皿等。洗涤时，先用清水浸泡30min，再 在加有洗涤剂的温水中刷试，之后清水冲洗2～3 遍，然后放入电热鼓风干燥箱中，加热至160℃后恒 温60min，自然冷却后待用。 5.2 橡胶、塑料制品 不耐高温的橡胶制品，如胶管等。洗涤时，先在加有洗涤剂的温水中清洗，之后用清水冲洗干净， 胶管内75%酒精过虑，胶管表面紫外线照射2h，然后放入无菌箱中待用；胶粒、枪头、胶塞洗净干燥后， 用75%酒精浸泡1min～2min 捞出，待酒精自然挥发后放无菌箱中保存备用。 5.3 金属制品 金属制品，如细管剪、镊子等。洗涤时，先在加有洗涤剂的温水中洗刷，之后用清水冲洗干净，干 燥后用75%酒精擦试消毒，然后放入无菌箱中备用。 6 稀释液配制 6.1 稀释液配方 6.1.1 一次稀释液配方相关信息参见附录A。 6.1.2 两次稀释液配方参见NY/T 1234-2006 中附录C 的内容。 6.2 稀释