j第八章目的基因的表达.pptVIP

宿主： 亮氨酸合成缺陷型酵母。 GAPD： 甘油醛磷酸脱氢酶 目前九十四页\总数一百七十页\编于十四点 （2）表达分泌型蛋白 在啤酒酵母中，只有分泌型的蛋白质才能被糖基化。 需要糖基化的重组蛋白必须是分泌蛋白。 方法： 构建载体 在重组蛋白的前面加一段编码酵母菌交配类型因子a1的前导肽，与重组蛋白的N端通过Lys-Arg相连。 前导肽（leader peptide）： 目前九十五页\总数一百七十页\编于十四点 蛋白质分泌到壁膜间隙时，酵母菌的内切蛋白酶识别这个切点信号，把重组蛋白正确切下来。 信号肽的切割： 前导肽 Lys-Arg 重组蛋白（水蛭素） 内切蛋白酶 目前九十六页\总数一百七十页\编于十四点 6.其它酵母表达系统 （1）乙肝表面抗原在嗜甲烷酵母中表达 在大型发酵反应器中容易生长； 以甲醇作唯一的碳源和能源，成本低。 有甲醇时，表达的乙醇氧化酶高达胞内总蛋白的40%！ ①嗜甲烷酵母（Pichia pastoris）的特点 目前九十七页\总数一百七十页\编于十四点 HBsAg: 乙肝表面抗原。可以作为疫苗。 Aox1：乙醇氧化酶基因1启动子（受甲醇激活调控）。 His4：组氨酸合成所需的组氨酸脱氢酶基因。 3’-aox1：整合到特定染色体的位点序列。 ②表达载体构建（整合型）： 诱导物：甲醇。 产量： 9×106剂疫苗/240L发酵罐。 目前九十八页