DB64 537_2009  脱毒草莓种苗病毒分子检测技术规程.docx

DB64 宁 夏 回 族 自 治 区 地 方 标 准 DB64/T 537—2009 脱毒草莓种苗病毒分子检测技术规程 2009-01-07发布 2009-01-07实施 宁夏回族自治区质量技术监督局发布 DB64/T 537—2009 目 次 目 次 I 前言 II 1 范 围 2 规范性引用文件 3 术语和定义 1 4 检测对象 2 5 检 测 方 法 2 6 检 测 规 则 3 附录A 5 附录B 6 II DB64/T 537—2009 前 言 本标准参照农业部行业标准NY/T406 《脱毒草莓种苗病毒检测技术规程》所规定的检测对象而确定。 与其区别一本标准引进了内标物，排除了假阳性，使检测体系更为科学。 本标准附录A、 附录B 为资料性附录。 本标准由宁夏农林科学院提出。 本标准由宁夏农牧厅归口。 本标准主要起草单位：宁夏农业生物技术重点实验室。 本标准主要起草人：宋玉霞、陈晓军、刘宝山、马洪爱、王敬东、陈虞超、甘晓燕、李苗。 DB64/T 537—2009 脱毒草莓种苗病毒分子检测技术规程 1 范围 本标准规定了脱毒草莓种苗的病毒分子检测方法和操作规程。 本标准适用于脱毒草莓组培苗、脱毒草莓原原种苗、脱毒草莓原种苗及脱毒草莓生产苗的病毒检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本规范，然而，鼓励根据本规范达成协议的各方研究 可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。 GB/T 2828.1计数抽样检验程序第1部分：按接受质量水平 (AQL) 检索的逐批检验抽样计划。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 脱毒草莓组培苗 经组织培养脱毒处理或直接引进，经检测后确认不携带草莓斑驳病毒、草莓镶脉病毒、草莓皱缩病 毒、草莓轻型黄边病毒的种苗。 3.2脱毒草莓原原种苗 指将草莓脱毒组培(瓶)苗移栽于无草莓病源、虫源的隔离区成活的植株。 3.3脱毒草莓原种苗 指由草莓脱毒原原种苗匍匐茎繁殖的植株。 3.4脱毒生产用苗 指由草莓脱毒原种苗匍匐茎繁殖用于生产草莓的植株。 3.5病毒病株允许率 指脱毒草莓母本株及种苗繁殖田中病毒病株的允许比率。 3.6脱毒率 指不携带本标准规定检测病毒的植株数占所检测植株总数的百分比。 3.7 AQL 接收质量水平限 (ACCEPTANCE QUALITY LIMIT) 的缩写。即当一个连续系列批次被提交验收 时，可允许的最差过程平均质量水平。 3.8 S-4 是计数抽样检验程序中设置的特殊检验水平之一。GB/T2828.1 设置了七个检验水平，由“低”到 “高”依次为特殊检验水平S—1,S-2,S—3,S—4 和一般检验水平I、Ⅱ、Ⅲ。 I、U、m三种水平 涉及的样本量的比例大约是1:2.5;4。 2 DB64/T 537—2009 4 检测对象 4.1草莓轻黄边病毒(Strawberry mild yellow edge-associated virus, SMYEV) 弱毒株系侵染，幼叶产生褐绿斑驳，叶片边缘失绿或卷曲呈杯状，植株长势衰退或矮化；强毒株系 侵染，幼叶反卷，产生褐绿黄斑，成熟叶片产生坏死条斑或叶脉坏死、扭曲，致整个叶片枯死。 4.2草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus, SMoV) 弱毒株系侵染，病株叶片出现黄白色，不整齐褐色斑驳；强毒株系侵染，病株矮化，叶片变小，扭 曲，呈丛簇状，叶脉透明，脉序混乱。在林丛草莓EMC 上发病较重，初发冲击波状，通常是叶片卷曲， 幼叶生长不对称，褪绿。弱毒株系可致数片小叶死亡，但前期仅叶柄变红，慢性症状包括弱毒株系在叶 片上产生褐绿斑，叶脉轻微透明，叶片皱缩及扭曲；强毒株系导致植株生长衰退、矮化，叶片变小。 4.3草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus, SCrV) 主要表现为叶片上产生褪绿斑，叶片大小不等，扭曲变形，叶柄上产生褐色或黑色坏死斑，在花瓣 上产生暗条纹或黑色坏死条斑。 4.4草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus, SVBV) 主要表现有卷叶、镶脉及坏死。卷叶症状为小叶向背面反卷，植株矮化。镶脉症状为发病初期病叶 沿主脉及次脉产生褪绿条斑，之后形成黄色条斑。坏死症状为发生在成熟叶片上，网脉变黑或坏死，脉 间组织褪绿或坏死，后期部分或全部枯死。 5 检测方法 本规程采用分子生物学PCR (聚合酶链式反应)扩增法进行病毒检测。 5.1 内标扩增 为了确定提取 RNA (