HG_T 4323-2012 循环冷却水中军团菌的检测与计数.docx

ICS 13.060.70,13.060.25 ICS 13.060.70,13.060.25 G 77 备案号：37849—2013 中华人民共和国化工行业标准 HG/T 4323—2012 循环冷却水中军团菌的检测与计数 Detection and enumeration of legionella in circulating cooling water 2012-11-07 发布 2013-03-01 实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 I HG/T 4323-—2012 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准使用重新起草法参考 ISO 11731:1998《水质 军团菌的检测和计数》(英文)和ISO 11731- 2:2004《水质军团菌的检测和计数-2 低菌数的直接膜过滤法》(英文)编制，与 ISO 11731:1998、 ISO 11731-2:2004 的一致性程度为非等效。 本标准的附录A 和附录B 为规范性附录。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出。 本标准由全国化学标准化技术委员会水处理剂分技术委员会(SAC/TC 63/SC 5)归口。 本标准起草单位：石家庄开发区德赛化工有限公司、上海轻工业研究所有限公司、石家庄市疾病预 防控制中心、中海油天津化工研究设计院、中国石油化工股份有限公司北京北化院燕山分院。 本标准主要起草人：李勇广、李静、李云、张全、郦和生、李丽婕、芦云红、郭玉梅、叶素妹。 1 HG/T 4323-2012 循环冷却水中军团菌的检测与计数 1 范围 本标准规定了循环冷却水中军团菌的检测与计数方法。 本标准适用于循环冷却水中军团菌的检测与计数，也适用于原水、生活用水及其他工业用水的军团 菌的检测与计数。循环冷却水系统中沉积物和生物黏泥等相关样本中军团菌的检测也可参照本标准。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法(mod ISO 3696:1987) GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 GB/T 27405 实验室质量控制规范 食品微生物检测术语和定义 3 术语与定义 GB/T 27405界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 军团菌 legionella 是一类菌种的总称，为革兰阴性杆形菌，两端钝圆，有鞭毛，无芽孢和荚膜，大小为(0.3～0.9)μm× (2～20)μm, 有41个种属、61个血清型。其中嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,Lp)有15个血清 型，是引起军团菌病的主要菌型。 4 安全 本标准规定的检测应符合 GB/T 27403 并应在二级隔离的生物实验室(BSL-2) 完成，检出军团菌 的样品及培养基应经过无害化处理。 5 方法提要 循环冷却水中军团菌数目一般达不到直接涂布检测的数目(105 cfu/L),应通过膜过滤或离心方式 浓缩水样中的微生物。为了减少杂菌对军团菌生长的抑制作用，对浓缩的微生物进行酸处理或热处理。 将浓缩后的试样或滤膜转移到对军团菌具有选择性的 GVPC 培养基上培养，生长的菌落为疑似军团 菌。军团菌的典型特性是在活性炭-酵母提取液培养基(BCYE) 生长而在 L-半胱氨酸缺失的 BCYE 培 养基(BCYE-Cys) 不生长。利用这一特性将疑似军团菌在 BCYE 和 BCYE-Cys 两种培养基上进行培 养，根据生长情况来确定是否为军团菌。另外，本标准中附录A 给出了嗜肺军团菌的鉴定方法，在常规 监测中可不进行嗜肺军团菌的鉴定，但是在军团菌疾病暴发时或有疑似病例时应进行嗜肺军团菌的 鉴定。 6 试剂和材料 6.1 本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合 GB/T 6682 三级水的 规定。 6.2 活性炭-酵母提取液培养基(BCYE 培养基):按附录 B 中 B.1 制备。 2 HG/T 4323—2012 6.3 L-半胱氨酸缺失的 BCYE 培养基(BCYE-Cys 培养基):见附录B 中 B.2。 6.4 选择性培养基(GVPC 培养基):按附录 B 中 B.3 制备。 6.5 酸缓冲液：按附录 B 中 B.4 制备。 6.6 Page 盐：按附录 B 中 B.5 制备。 6.7 氧化酶试剂：按附录B 中 B.6 制备。 6.8 硝酸盐培养基：按附录 B 中 B.7 制备。 6.9 尿素琼脂：按附录 B 中B.