逆转录酶的发现.pptxVIP

逆转录酶的发现 第1页/共18页 逆转录酶的发现 第2页/共18页 目录 一. 科学史 二. 发现逆转录酶的背景 三. 证明逆转录酶的存在 四. 逆转录酶的生物学意义 第3页/共18页 第4页/共18页 科学史 逆转录酶是1970年美国科学家Howard Temin和David Baltimore分别于动物致癌RNA病毒中发现的，他们并因此获得1975年度诺贝尔生理学或医学奖。 第5页/共18页 1958 年, 坦明开始对RN A 肿瘤病毒 (R S V ) 的研究 。 R S V 属RN A 病毒 。 坦明发现, R S V的行为不同于DN A 病毒, 也不同于一般的RN A 病毒 。 大多数病毒与细胞分裂是对抗性的 。当把病毒加到单层细胞培养物上时, 病毒与细胞的相互作用, 常导致感染细胞的死亡 。 而感染了 R S V 的雏鸡细胞, 非但存活下来, 而且转化成能继续分裂并且产生新病毒颗粒的癌细胞 。 感染 R S V 大鼠细胞转化成了能分裂的癌细胞, 但不产生新的病毒颗粒 。当把转化了的大鼠细胞与正常的雏鸡细胞融合时, 可以诱发R S V 颗粒的形成 。坦明利用放线菌素D 所做的实验解释了这种现象 。 第6页/共18页 发现逆转录酶的背景 Crick最初设想的中心法则, 并没有排除遗传信息由RNA向DNA的逆向传递 。但当时绝大多数生物学家都认为, 自然界的生物体并不需要这种逆向传递。然而, 通过 1960 到1970 这十年的研究, Howard Temin和David Baltimore等发现并证实了反转录酶的存在 。 第7页/共18页 放线菌素D 能抑制以DN A 为模板的 RN A 合成, 但不影响以 RN A 为模板的 RN A 合成 。 坦明把放线菌素D 加到形成 R S V 的细胞培养物中, 发现全部的 RN A 合成都受到了抑制 。他认为, R S V 可能是通过一种DN A 中间物进行复制的, 即当 R S V 感染细胞以后, 可以其 RN A 为模板合成相应的 DN A 分子, 该 DN A 分子整合到细胞的 DN A 分子中, 随细胞DN A 的复制而复制, 并不呈现感染性 。 当受到某种激活时, 又能以有感染性的病毒颗粒的形式重新出现 。这就是 “ 原病毒假说” 。它的提出, 使人们认识到逆转录现象的存在 。1970 年,坦明和水谷哲 (S A TO SH I M i zu tan i ) 在实验中发现, R S V 的病毒粒子含有一种能把单股病毒 RN A 转录到DN A 上去的酶 。与此同时, 巴梯摩尔独立地用小白鼠败血病病毒为材料, 也发现了同样的现象 。 他们的文章一同发表在 1970 年 6 月 27 日的 《自然》 杂志上, 使逆转录现象得到了公认 。 这样, 中心法则就修正成所示的形式如图 第8页/共18页 → 正常的雏鸡细胞 → 正常的雏鸡细胞 → 正常的雏鸡细胞 → 第9页/共18页 前病毒假说 1970 年,坦明和水谷哲 (S A TO SH I M i zu tan i ) 在实验中发现, R S V 的病毒粒子含有一种能把单股病毒 RN A 转录到DN A 上去的酶 。与此同时, 巴梯摩尔独立地用小白鼠败血病病毒为材料, 也发现了同样的现象 。 他们的文章一同发表在 1970 年 6 月 27 日的 《自然》 杂志上, 使逆转录现象得到了公认 。 第10页/共18页 证明逆转录酶的存在 Can a retrovirus perform DNA synthesis? 反转录病毒进行DNA的合成？ 第11页/共18页 实验步骤 各组加入放射性标记的脱氧胸苷三磷酸（dTTP的），连同其他三个脱氧核苷三磷酸（的dATP，dCTP，dGTP）到病毒颗粒的准备物中，并寻找掺入到DNA的放射性dTTP。事实上，在每个实验中，放射性标记的dTTP都被并入核酸。 第12页/共18页 当Baltimore加了放射性标记的核苷酸三磷酸（的rNTP）和其他三个核糖核苷三磷酸来破坏病毒时，他可能没有检测到RNA的合成。 为了证明所形成的产物实际上是DNA，用特异性酶降解或RNA（核糖核酸酶，或RNA酶）或DNA（脱氧核糖核酸酶，或脱氧核糖核酸酶）。他们发现产物是唯一的，只对DNA酶敏感。这些简单的实验，总结在上表中的结果表明，在颗粒中的一种酶能合成DNA。 第13页/共18页 模板是什么？ Baltimor和Temin用RNA酶处理预培养的病毒粒子，它催化RNA降解成单磷酸核糖核苷酸（rNMPs）。如果RNA是真正的模板，在模板降解后，会阻止由病毒颗粒制剂使DNA合成。事实上，这是事实。 用RNA酶预处理病毒粒子的时间越长，DNA合成活性越低，从而证明在病毒体的一种酶能催化