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生物化学实验图文新第1页/共45页第2页/共45页实验室规则(一) １、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不得喧哗吵闹、迟到早退，更不得缺席。 ２、爱护仪器，厉行节约。试剂、药品、蒸馏水等应节约使用，不得浪费。如不慎损坏仪器，应及时报告老师，说明原因，经老师同意后，方可换领。并应按规定赔偿或处理。贵重、精密仪器，应先熟悉使用方法，在老师的指导下，严格按操作规程操作，发现故障，应立即报告老师，不得擅自处理。第3页/共45页实验室规则（二） ３、取用试剂时，应仔细辨明标签，以免取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好，放回原处，切忌乱拿乱放，“张冠李戴”。 ４、注意安全，用吸量管吸取试剂时应使用吸球，严禁用嘴吸取。对于有毒、腐蚀的试剂更应注意，应避免其直接接触人体及衣物。乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火源，以免发生意外。第4页/共45页实验室规则（三） ５、注意实验室卫生、整洁。废弃液体应倒入水槽，放水冲走，实验用过的和棉花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均应放入指定容器，不得随意乱扔或丢进水槽。实验结束后应将实验台整理好。并清扫、整理实验室。关好水、电、门、窗，经老师检查同意后，方可离开实验室。第5页/共45页实　验　目　录糖的颜色反应氨基酸的纸层析血清蛋白的醋酸薄膜电泳脂肪酸酸价和碘价的测定DNA的提取与定性实验过氧化氢酶和过氧化物酶的作用第6页/共45页实验参考书生物化学实验，陶均辉等编，科学出版社，第三版；基础生物化学实验，王秀奇等编，高等教育出版社，第二版；动物生物化学实验指导，周顺伍主编，中国农业出版社，第二版。第7页/共45页实验一　 糖的颜色反应　实验安排　实验原理　实验试剂　实验步骤　思考题To Index第8页/共45页 实验安排： 2课时，单人单组 实验原理： 莫氏反应：糖经无机酸脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与1-萘酚生成紫色的缩合物，可用于鉴定糖的存在。塞氏反应：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色，可用于鉴定酮糖的存在。杜氏反应：戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后者与间苯三酚作用生成桃红色物质，可用于鉴定戊糖的存在。第9页/共45页实验试剂：Molish（莫氏）试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存； Sediwanoff（塞氏）试剂：0.5g 间苯二酚溶于1升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前配制；杜氏试剂：称取2g间苯三酚，溶于250mL95%乙醇中。临用时取此液3mL，缓缓加入15mL浓盐酸及9mL蒸馏水，临用时配制。第10页/共45页 实验步骤： 莫氏反应（按下表加试剂） 管号 1%葡萄糖/ml1%蔗糖/ml1%淀粉/ml纤维素莫氏试剂浓硫酸/ml现象112D2212D2312D24少许2D2注意: (1) 莫氏试剂直接加入溶液中，不能滴在试管壁上！ (2) 加浓硫酸时，试管倾斜，硫酸缓缓加入，不要振动溶液！第11页/共45页 塞氏反应(按下表加试剂)管号1%果糖1%蔗糖1%葡萄糖塞氏试剂现象(沸水浴加热)并解释10.5ml2.5ml20.5ml2.5ml30.5ml2.5ml注意：加热时间要长，观察颜色变化及变化的顺序。颜色变化顺序用1、2、3标记，深浅用+、++、+++等表示。第12页/共45页 杜氏反应(按下表加入试剂) 管号1%葡萄糖1%半乳糖1%阿拉伯糖杜氏试剂现象（沸水浴加热）并解释11D1ml22D1ml33D1ml注意：观察颜色变化及变化时间。 第13页/共45页思考题莫氏反应中莫氏试剂为什么要直接加入溶液中，不能滴在试管壁上?加浓硫酸时，试管倾斜，硫酸缓缓加入，为什么不能振动溶液？ 第14页/共45页实验二　氨基酸的纸层析 重点与难点：氨基酸纸层析的基本原理的理解是本实验的难点。重点是掌握氨基酸纸层析的操作方法和运用。实验安排：4课时，每人独立实验，4人一个层析缸。To Index第15页/共45页实验原理纸作支持物，特点是-OH多，亲水性强。溶剂系统分成两相：固定相（水）特点是易与-OH结合移动慢。移动相（水饱和的有机溶剂）特点是移动速度快。不同的氨基酸在不同的相中溶解度不同，不同的氨基酸在不同的相中移动速度不同，不同的氨基酸在相同的相中移动速度也不同。基于以上三点原因，经过层析后，不同的氨基酸移动的距离不同，从而得到分离。分离度用Rf值表示如下： Rf=原点到层析点中心的距离/ 原点到溶剂前沿 的距离第16页/共45页试剂与器材：氨基酸液（5种）、正丁醇、冰醋酸、水、茚三酮、层析滤纸、层析缸、吹风机、喷瓶、铅笔、直尺、分液漏斗 各式各样的喷瓶层析缸第17页/共45页实验步骤实验准备点样 展层 显色 记录 计算Rf 值 结论 第18页/共45页实验准备层析液配制: 正丁醇:冰醋酸: