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微生物实验六 第一页，共十页，2022年，8月28日 【目的要求】 了解细菌生长曲线的持点及测定原理； 掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。 第二页，共十页，2022年，8月28日 【基本原理】 将一定数量的细菌，接种于适宜的液体培养基中，在适温下培养，定时取样测数，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，作出的曲线称为生长曲线。该曲线表明细菌在一定的环境条件下群体生长与繁殖的规律。一般分为延缓期、对数期、稳定期及衰亡期四个时期，各时期的长短同菌种本身特征、培养基成分和培养条件不同而异。 比浊法是根据细菌悬液细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比关系，利用光电比色计测定细胞悬液的光密度(即OD值)，用于表示该菌在本实验条件下的相对生长量。 实验设正常生长、加酸抑制和加富培养等三种处理，以了解细菌在不同生长条件下的生长情况。 第三页，共十页，2022年，8月28日 【实验用品】 1. 活材料：大肠杆菌(E.coli)。 2. 培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支(每支10mL)，浓缩5 倍的牛肉膏蛋白胨培养基1支。无菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。 3. 器材：1mL无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、标签等。 第四页，共十页，2022年，8月28日 【方法步骤】 方法一： 1.接种 取13支装有牛肉膏蛋白胨培养液的试管，贴上标签(注明菌名、培养处理、培养时间、组号)。按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2mL的大肠杆菌培养液，接种后，轻轻摇荡，使菌体混匀。另一支不接种的培养管注明CK(对照)。 第五页，共十页，2022年，8月28日 【方法步骤】 2. 培养 将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、1．5、3、4、6、8、10、12和14h后取山，放冰箱中贮存，待测定。加酸处理。取出经4h培养的另二支培养管，按无菌操作法加入lmL无菌酸溶液，摇匀后放回摇床上，继续振荡培养，于培养8h和14h后取出放冰箱中贮存，待测定。加富营养物处理。余下的二支培养管于培养6h后取出，按无菌操作法加入浓缩5倍的牛肉膏蛋白胨培养液1mL，摇匀后，继续进行振荡培养，于培养8h和14h后取出，放入冰箱中贮存，待测定。 第六页，共十页，2022年，8月28日 【方法步骤】 3.比浊 将培养不同时间、形成不同细胞浓度的细菌培养液进行适当稀释，使光密度值在0.0-0.4范围内，以未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基调零点，在光电比色计上，选用400-440nm波长的滤光片进行比浊，从最稀浓度的菌悬液开始，依次测定。 第七页，共十页，2022年，8月28日
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