EMS处理对黄花美冠兰原球茎生长及分化的影响.docxVIP

? ? EMS处理对黄花美冠兰原球茎生长及分化的影响 ? ? 邓小果 (海南开放大学农业农村学院，海南 海口 570208) 黄花美冠兰(Eulophia flava(lindley)Hookerf.)是一种观赏价值很高的野生兰科植物，其花葶侧生，粗壮，高可达1m；总状花序直立，长28～32cm，疏生10余朵花；单花轮生，每节着生3朵小花，节间距1.5cm左右；花大，黄色，直径达4cm以上；花期5—6月。早在1987年，中国热带农业科学院在海南岛花卉种质资源考察中，就将黄花美冠兰列为重点推荐的野生兰种类[1]，引入海南热带植物园驯化栽培。黄花美冠兰的组织培养[2]、核型分析[3]、切花保鲜[4]都有相关的研究。 化学诱变育种是用化学诱变剂处理植物材料，以诱发遗传物质的突变，从而引起形态特征的变异，然后根据育种目标，对这些变异进行鉴定、培育和选择，最终育成新品种，成本低、操作简单，能够产生常规育种方法难以获得的新基因和新性状[5,6]。目前化学诱变主要应用于对农作物的处理，再通过多世代对突变体进行选择和鉴定，直接或间接地培育成生产上能利用的农作物品种[7-9]。 观赏植物在化学诱变中大多采用秋水仙素诱导多倍体[10-13]，蝴蝶兰[14]、文心兰[15]EMS离体化学诱变技术有相关报道，黄花美冠兰EMS的离体化学诱变研究尚未见报道。本试验采用组织培养与化学诱变技术相结合，通过液体浸泡法将不同浓度的EMS对黄花美冠兰原球茎作不同时间处理，经EMS处理后的原球茎再分化成苗。与传统杂交育种选育，大大减轻了工作量，加快了选育进程，拓宽了黄花美冠兰新品种选育的思路。 1 材料与方法 1.1 材料 试验材料为海南大学提供的健壮的黄花美冠兰原球茎。 1.2 诱变剂及培养基 1.2.1 诱变剂 EMS(甲基磺酸乙酯)为瑞士生产，将带有刻度的烧杯和无菌水在121℃(1.1kg·cm-1)下灭菌30min，在超净工作台上用过滤灭菌器将EMS原液配成浓度分别为0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0% 5种浓度的溶液，随用随配。 1.2.2 培养基 增殖培养基：MS加BA 3.0mg·L-1加NAA 0.1mg·L-1加10%CM加AC 1g·L-1加蔗糖30g·L-1加琼脂6g·L-1；分化培养基：MS加BA 3.0mg·L-1加NAA 0.1mg·L-1加土豆50g·L-1加AC 1g·L-1加蔗糖30g·L-1加琼脂6g·L-1。 1.3 方法 1.3.1 EMS处理 选取生长旺盛，大小基本均匀的黄花美冠兰原球茎，在超净工作台上用镊子将其单个剥离，用不同浓度EMS的进行处理。EMS处理浓度为0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%。处理时间为4h、6h、8h，处理后用无菌水冲液冲洗3～5次；以无菌水处理作为对照。 1.3.2 处理材料的培养 将处理后的原球茎接到增殖培养基中，每个处理接种40个原球茎，每个处理重复3次，所有材料均在同一条件下培养。培养温度26±1℃，每天光照12h，30d后统计死亡率。培养过程中观察原球茎的生长情况。 死亡率(%)=死亡原球茎数/接种原球茎数×100% 1.3.3 原球茎分化 将继代后存活的原球茎继续转入分化培养基中，培养温度26±1℃，每天光照12h，30d后观察生长情况并统计分化率。 分化率(%)=分化成芽原球茎数/接种原球茎数×100% 1.3.4 EMS对黄花美冠兰微核的影响 1.3.4.1 试验方法 浓度分别为0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%的EMS溶液；时间为4h、8h。对照(CK)不含EMS。 取接种3d后正处于生长旺盛期的原球茎，于4℃冰箱中，用卡诺氏固定剂(无水乙醇∶冰醋酸=3∶1v/v)固定24h。置70%乙醇中保存。 1.3.4.2 染色制片 在室温中用改良石灰酸品红染液染色，常规压片法制片。统计微核率。 MCN(%)=观察到的MCN数/观察的细胞总数×100 2 结果与分析 2.1 EMS对黄花美冠兰原球茎生长的影响 将原球茎放入0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%不同浓度的EMS浓度中浸泡4h、6h、8h后，接种到增殖培养基中，结果如表1。 各处理所得的原球茎死亡率在经过反正弦角度代换在SAS系统上进行邓肯比较。得出，F=442.86，P0.01，表明处理间的差异达极显著。由表1可知，不同EMS浓度及处理时间对原球茎的存活有很大的影响。在EMS处理黄花美冠兰原球茎过程中，随着EMS处理浓度增大，处理的材料生理损伤较大，材料出现褐化，白化现象。经过EMS处理的原球茎早期生长缓慢，14d后部分原球茎逐渐出现白化或褐化现象，并逐渐死亡。对照原球茎无白化现象，经EMS诱变后的死亡率明显高于对照组，在相同的处理时间内，随EMS浓度升高原球茎的死亡率