AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程.docxVIP

SOP04006 Page PAGE \* Arabic 3 / NUMPAGES \* Arabic 29 文件名称：AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程 文件名称 AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程 使用维护标准操作规程 颁发部门 制订人： 复核人： 批准人： 质保部 制订日期： 复核日期： 批准日期： 执行日期 版本 1.0 编号 SOP04006 制作份数 _____份 发送部门 修订记录 修订人 修订原因 修订内容 版本 修订日期 目的： 确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。 范围： 适用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及维护。 定义： 无 职责： 荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。 质保部对本规定的有效执行承担监督检查责任。 内容： 5.1 室内温度控制在15～30℃，相对湿度45～75%。 5.2 仪器操作 5.2.1 依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows界面。 5.2.2 接着打开AB7500仪器电源开关，预热10分钟。 5.2.3 点击7500 Software v2.3图标，打开软件。 5.2.4 按压仪器托盘上的按压位，待托盘弹出后，将所需检测的8联PCR反应管或者96孔PCR反应板放入检测孔位，记下放置位置。检测8联PCR反应管用**反应孔模块，检测96孔PCR反应板用**反应孔模块。（检测8联PCR反应管需放入盖紧管盖的空8联PCR反应管配平，检测96孔PCR反应板无需配平） 5.2.5 再次按压托盘使其滑入仪器。 5.2.6 新建扩增参数模板：例如新建一个UG-63-62的模板，扩增参数是95°，10′；（95°，10″；63°，45″）×5 cycles；（95°，10″；62°，35″）×40 cycles，在62°时收集荧光信号（HEX、FAM信号），20μl反应体系。 5.2.6.1 在Setup-Plate Setup-Define Targets and Samples中，将Target Name下的Target1改成FAM；点击Add New Target，将新增的Target1改成HEX，点击Reportee下拉菜单，选择VIC。 5.2.6.2在Setup-Run Method-Graphical View中的Reaction Volume Per Well后面输入20（20μl反应体系）。选中第一个Holding Stage，点击Delete Selected删除；在Cycling Stage中的Number of Cycles后输入5，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度63度，输入时间45秒，将63度下面收集荧光图标点掉；点击Add Stage下拉菜单选择Cycling，在Cycling Stage中的Number of Cycles后输入40，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度62度，输入时间35秒，在62度下面点击图标收集荧光。 5.2.6.3 点击Save下拉菜单下的Save As Tamplate，文件名输入UG-63-62，保存在默认ab7500-config-tamplates文件夹内，关闭设置界面。 5.2.7 已有扩增参数模板：在软件Home界面中点击Template，选择需要的模板，点击打开。例如：UG-63-62，其扩增参数就是95°，10′；（95°，10″；63°，45″）×5 cycles；（95°，10″；62°，35″）×40 cycles，在62°时收集荧光信号（HEX、FAM信号），Reaction Volume Per Well:20μl（20μl反应体系）。 5.2.8 在Setup-Plate Setup-Assign Targets and Samples中选择8联管摆放的位置，全部勾选Sample 1；UGT1A1*6勾选HEX，UGT1A1*28勾选FAM。 5.2.9 在Run-Amplification Plot中点击START RUN，命名1（当日日期+当日上机次数，例:2014年1月1日第1次上机编号1），保存在默认文件夹中，开始运行。 5.2.10 结果分析 5.2.10.1 PCR反应结束后自动保存结果，对扩增曲线进行分析。 5.2.10.2 也可根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以（用户可根据实际情况自行调整，Start值可以在3～15、End值可设在5～20），Threshold值（Rn）推荐设定为5000～15000，点击Analyze进行分析