DB37T 607-2006牛奶中链霉素残留量的测定 酶联免疫吸附法.pdf

ICS 67.100.01B40DB37备案号山長东省地電方标准DB37/T607—2006牛奶中链霉素残留量的测定酶联免疫吸附法Determination of streptomycin in milkenzyme linked immunosorbent assay200×-X×-××发布2006-07-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T607—2006前言本标准由山东省备牧办公室、山东省畜牧业标准化技术委员会提出，本标准负责起草单位：山东省畜产品质量检测中心。本标准主要起草人：高迎春、陈玲、冯修光、魏秀丽， DB37/T607—2006牛奶中链霉素残留量的测定酶联免疫吸附法1范围本标准规定了牛奶中链霉素残留量的酶联免疫吸附法测定方法。本标准适用于牛奶中链霉素残留量的快速检测。本方法检测限为12g/L。该方法适合于对试样的筛选，检测结果阳性者，需进一步用其他方法确证。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理酶联板的微孔板包被有针对免IgG的抗体。如入链毒素抗体，链毒素酶标记物，链毒素标准或样品落波，链毒素与链毒素酶标记物竞争链毒系抗体结合位点，同时链毒系抗体也与固定的羊抗体结合：通过洗涤除去没有结合的链毒系酵标记物。加入底物溶液，结合的链毒系酵标记物将底物转化为蓝色的产物：加入反应终止液后由蓝色转变为黄色，用酶标仪在450nm处测量吸收度，标准曲线计算。4材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水为蒸馏水，符合GB/T6682三级水的规定4.1链毒系系列标准落液4.2链毒素酶标记抗原4.3链毒素抗体4.4底物4.5底物缓冲液4.6发色剂4.7反应终止液4.8缓冲溶液5-仪器5.1分析天平：感量0.01g5.2微量移液器：单道1μL100μL；多道50μl250μL.5.3振荡器5.4酵标板5.5酵标仪6测定步骤1 DB37 /T6072006使用不同品牌试剂盒时，试样的提取方法和测试程序可根据试剂盒说明书略作调整，6.1试料的提取取新鲜牛奶或解冻牛奶50μL，加水950μL，1：20稀释，作样品液备用。6.2测试程序6.2.1取出酶标板（5.4）及所有试剂，使试剂盒温度升至室温。6.2.2分别吸取系列标准溶液（4.1），空白试料，试样溶液各20μL放入不同微孔底中央，并在每孔内加入用缓冲溶液（4.8）10倍稀释的酵标记抗原（4.2）20μL6.2.3加入用缓冲溶液(4.8)10倍稀释的抗体(4.3)100μL，封口膜封板，室温孵育30min。6. 2. 4倒出孔内液体，将酶标板（5.4）倒置在吸水纸上拍打，使孔内没有残余液体.用多道移液器加水250μL到酶联板的微孔内，然后倒出孔内液体，如此重复操作三次，6.2.5加入用底物缓冲溶液(4.5)10倍稀释的底物到每一微孔中，室温避光孵育30min。6.2.6用多道移波器每孔加终止波（4.7）100μL.6.2.7将醛标板（5.4）放于醛标仪内，于450nm波长处立即测定吸光度值。以零标准吸光度值A为100%计算，折算出各标准和试样的相对吸光度值。以此吸光度百分比为织坐标，对应的各标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。待测样品根据其吸光度，查标准曲线得到盐酸克伦特罗的含量（m）2结果计算试样中链霉素的含量（X）以μg/L表示，按公式(1)计算×Dm..* (1)式中:00/从标准曲线上查得的试料提取液中的链霉素的质量，单位为微克（μg）：试料质量，单位为升（L）：稀释倍数。以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。计算结果保留三位有效数字，结果判定当检测结果链霉素含量小于临界值，判断牛奶样品为阴性，当检测结果链素含量高于等于临界值，则结果可疑，需用确证法确证。临界值为空白试料中添加链毒素到200ug/L，至少20个平行样品进行测定按式（2）计算/=1. 64X Sd式中：1一临界值：4一空白添加样品中链霉素含量平均值：S一空白添加样品中链霉素含量的标准差。4精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的20%。2