NY_T 3853-2021CN猪殃殃对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程.pdf

ICS 65.100CCS B 17NY中华人民共和国农业行业标准NY/T3853—2021猪殃对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程Technical code of practice for detection the target-site resistance of Galiumspurium Linn. to acetolactate synthase inhibiting herbicides2021-05-07发布2021-11-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY/T言本文件按照（GB/T1.1-2020标准化T.作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起年本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。本文作起章单位：中国农业科学院植物保护研究所。本文件主要起草人：掘海兰、李香菊、陈景超、李政、彭立存、郭小桐。 NY/T 3853—2021猪对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程1范围本文件规定了猪映映(Galiam spuritm Linn.》异名 Galium gparine Linnvar，tenerum Gren.et(Godr.）Rebb.J对乙酰乳般合成酶(acetolactate synthase，ALS)抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程的基本要求以及注意事项。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单适用于本文件。NY/T1667—2008农药登记管理术谱NY/T1859.4农药抗性风险评估第4部分乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂抗性风险评估NY/T3285—2018播娘嵩对乙酰乳胶合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程3术语和定义上述引用文件中界定的术语和定义适用于本文件。4检测程序4.1材料培养选择无猪狭狭种子、无除草剂残留的农田地表土，混合20%～30%的草炭土，混合均匀后装人直径不小于10cm的培养体；待测种群及敏感对照种子用0.05%～0.1%的赤需素溶液浸泡12h~24h后冲洗干净(或其他打破休眠处理），均匀播在土壤表面，覆土约1cm，采用盆体底部渗灌方式补充水分，土壤相对湿度保持在60%~70%；置于25℃115C(D·N)，光周期12h:12h(LiD)条件下培养。待猪映狭长至2叶期，闻苗，每盆保留长势一致的10株，4.2生物测定待植株长至3叶期，用待测除草剂(ALS抑制剂类除草剂)进行茎叶喷雾处理，药剂处理至少设置5个剂量，每个剂量不少于4次重复，每个重复10株，施药21d后，调查每个处理的存活核株数、地上部分鲜重或干重，按公式(1)计算杂草株防效、鲜重或干重抑制率。Y-M,X 100 *(1)式中：株防效、鲜重或于重排制率，单位为百分号（%)；M,除革剂有效剂量Xga.i./hm处理后存活植株数、地上部分鲜重或干重的数值，单位为株或克(g);M。——对照总株数、地上部分鲜重或干重的数值，单位为株或克(g)。以杂草株防效、鲜重或干重抑制率为指标，按公式(2)计算生长掉制中量，D-C(2)式中：株防效、鲜重或干重抑制率，单位为百分号(%)；- NY/T:Y值下限，单位为百分号（%)；D—Y值上限，单位为百分号（%)；X一一除草剂有效剂量的数值.单位为克每公项（ga，i./hm)；GR:，-一生长摔制中量的数值.单位为克每公项（gai/hm)；斜事，按公式(3)计算抗药性借数RI。RI :GRaGR ss(3)式中;RI抗药性倍数；GR T抗药性种群生长抑制中基的数值.单位为克每公项（ga.i./hm）；GR :ps敏感性种群生长抑制中的数值，单位为克每公项（ga.i./hm)。4. 3靶标基固检测4. 3. 1DNA提取取杂草动嫩叶片.约200mg.采用I六烷基=甲基溴化铵(CTAB)法或商品化试剂盒提取总DNA。每个抗药性种群随机检测抗药性植株不少于10株，并单检测。用1%源脂费凝胶电浓检测提取的DNA费址是否合格，电泳出现一条清晰明亮的条带，表明DNA较完整，无降解。DNA样品的纯度及浓度检测：用分光光度计测定DNA溶液在260nm处的吸光值（OD%）。ODs等于1时.样品中DNA浓度为50g/nl按公式(4计算INA浓度。Cra OD X A X 50 ..*(4)式中;CrN1DNA浓度，单位为微克每意升（gg/ml.）；OD a-DNA游液在260nm处的吸光值：A稀释倍数。通过测定DNA液在260nm和280nm处的吸光低((OD和(OD）检测DNA统度，OD/D在1.7~2.0之间，表明DNA的纯度较好，经过电泳和吸光度检测，质量和纯疫符合