DB37T 342-2003硫酸软骨素含量的检测方法.pdf

ICS 71.040t00DB37山長东省地方标准DB37/T 342—2003硫酸软骨素含量的检测方法Determination method for chondroitin sulfate2003-01-24发布2003-02-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 342—2003前言本标准由山东出入境检验检疫局提出并归口。本标准由青岛出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：牛增元、张小吐、刘钢、孙忠松。- DB37/T 342—2003硫酸软骨素含量的检测方法1范围本标准规定了用高效液相色谱法测定硫酸软骨素含量的方法。本标准适用于从牛、猪和萄鱼等动物软骨组织中提取的硫酸软骨素钠盐或钙盐的检测，2测定方法用少量乙睛将适量的硫酸软骨素样品分散开，然后用超纯水溶解并定容。使用配有C1s色谱柱及二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。2.1试剂和材料2.1.1乙晴：HPLC级2.1.2超纯水：由蒸馏水经超纯水器制备。2.1.3硫酸软骨素A、B、C标准品：硫酸软骨素A的钠盐来自于牛的气管，纯度近似为70%，其余为硫酸软骨素C：硫酸软骨素B的钠盐来自于猪皮，纯度近似为90%，其余为硫酸软骨素A和C：硫酸软骨素C的钠盐来自于鲨鱼的软骨，纯度近似为90%，其余为硫酸软骨素A.2.1.4标准溶液：称取0.10g（准确至0.1mg）经105℃干燥4h的硫酸软骨素标准品于烧杯中，加入2.5mL乙情，使其很好地分散开，再加入超纯水，在超声波水浴槽中使其落解，转移至50mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，作为标准储备液，准确移取上述溶液10mL，稀释并定容至50mL，作为标准工作液，浓度约为0.40mg/mL。2.2仪器和设备2.2.1容量瓶：50mL.2.2.2超声波水浴槽，2.2.3分析天平：感量为0.1mg2.2.4高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器，2.3测定步骤2.3.1样品溶液的配制称取0.10g（准确至0.1mg）硫酸软骨素样品于烧杯中，加入2.5mL乙睛，使其很好地分散开，再加入超纯水，在超声波水浴槽中使其溶解，转移至50mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度。准确移取上述溶液10mL，稀释并定容至50mL，供色谱测定，在液相色谱仪上测定时，样液用0.2μm滤膜过滤。2.3.2色谱条件a）流动相：乙睛和2.28mmol/L四甲基氯化铵水溶液的混合液（体积比为5:95)：b)色谱柱：Cls(2)250mmX4.6mm，5μm;c)流速：0.6mL/min;d）检测器波长：195nm；e）进样体积：5μL.2.3.3色谱测定分别将标准工作液、样液注入高效液相色谱仪进行测定。2.4结果的计算硫酸软骨素的含量按下式计算：1 DB37/T 342—2003W=A Xm, /( A,Xm) X 100%式中：W-样品中硫酸软骨素的百分含量，%；A-样液中硫酸软骨素的色谱峰面积：m,标准品的质量，g：A,标准品的色谱蜂面积：样品的质量，g-3方法的准确度和精密度3.1回收率本方法的回收率为98.8%～100.3%，3.2精密度本方法的相对标准偏差在0.17%～0.53%之间。2