NY_T 3140-2017饲料中苯乙醇胺A的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3140—2017饲料中苯乙醇胺A的测定高效液相色谱法Determination of phenylethanolamine A in feeds-High performance liquid chromatography2018-06-01实施2017-12-22 发布中华人民共和国农业部发布U NY/T 3140—2017前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（成都）。本标准主要起草人：张静、赵立军、程传民、陈红、高庆军、王宇萍、李云I NY/T3140—2017饲料中苯乙醇胺A的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中苯乙醇胺A的高效液相色谱测定法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中苯乙醇胺A的测定。本标准方法的检出限为1.0mg/kg，定量限为2.0mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本义件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备农业部1486号公告一1一2010饲料中苯乙醇胺A的测定高效液相色谱一串联质谱法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1苯乙醇胺Aphenylethanolamine A化学名称为2-［4-（4-硝基苯基)丁基-2-基氨基}-1-（4-甲氧基苯基)乙醇，俗称克伦巴胺。分子量为344.17,分子式CigH2N2O4，英文名称2-[4-(nitrophenyl)butan-2-ylamino]-1-（4-methoxyphenyl）ethanol。化学结构式如下：OH/CH,ONHNOCH;4原理试样中的苯乙醇胺A经甲酸甲醇溶液提取、固相萃取柱净化后，用高效液相色谱仪进行测定，外标法定量。5试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T6682中一级水的规定。5.1乙：色谱纯。5.2甲醇。5.3甲酸：优级纯。5.4苯乙醇胺A对照品：纯度≥95%。5.50.1%甲酸溶液：取甲酸1.0ml加水定容至1000ml.，摇匀即得。I NY/T3140—20175.6甲酸甲醇溶液：取甲酸0.1mlL，加人甲醇定容至100ml，摇匀即得。5.7稀释液：取0.1%甲酸溶液（5.6)80ml，加乙腈至100mlL，摇匀即得。5.8氨化甲醇溶液：取氨水5ml，加人甲醇至100ml，摇匀即得。5.9标准储备溶液：100μg/ml，准确称取苯乙醇胺A50mg（精确到0.1mg），用甲醇配制成100μg/ml的标准储备溶液，一18℃避光保存备用，有效期为6个月。5.10标准工作溶液：用稀释液（5.7）稀释标准储备溶液（5.9），配制成浓度范用为1.00μg/ml.、2.00uμg/ml、5.00μg/ml、10.0μg/ml、25.0μg/ml、50.0μg/ml.的标准工作溶液，4℃避光保存，有效期1个月。5.11混合型阳离子固相苯取柱：3ml，60mg;或相当的分析柱。5.12微孔滤膜：0.45μm，有机相。6仪器和设备6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。6.2天平：感量1mg。6.3分析天平：感量0.1mg。6.4离心机：转速为5000r/min及以上。6.5超声水浴。6.6涡旋混合器。6.7固相萃取装置。6.8氮吹装置。7试样制备按照GB/T14699.1的规定，抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按照GB/T20195的规定制备样品，全部通过0.28mm孔筛，混匀，装人密闭容器中，避光常温保存，备用8测定步骤8.1提取称取饲料试样2g（精确到0.001g），置于50ml.离心管中，准确加入甲酸甲醇溶液（5.6)20.0mlL，涡旋混合30s，超声提取20min，期间摇动2次；取出后，于离心机上5000r/min离心5min，取上清液，备用。8.2净化固相苯取柱（5.11)分别用甲醇3ml、水3mL活化，准确移取上清液（8.1)5.0mL过柱，分别用水3ml、甲醇3ml.淋洗，近干后用氨化甲醇溶液（5.8)3mlL洗脱。收集洗脱液，在氮吹装置上50℃下用氮气吹干。准确加入稀释液（5.7)1.0ml溶解，过0.45um微孔滤膜，供高效液相色谱仪测定。8.3测定8.3.1高效液相色谱条件色谱柱：Cl8柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5um；或性能相当的分析柱；柱温：30℃；流动相A为0.1%甲酸溶液，流动