SN 1357-2004茨城病免疫琼脂扩散试验方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1357--2004茨城病免疫琼脂扩散试验方法Protocol of AGID for ibaraki disease2004-12-01实施2004-06-01发布3#5155152中华人民共和国数码防伪，发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1357--2004前言本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：刘友清、卢晓中、栾风钦、潘学昌、姜勇。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1357--2004茨城病免疫琼脂扩散试验方法１范围本标准规定了牛茨城病免疫琼脂扩散试验方法。本标准适用于进出境牛茨城病的检疫。2 材料2. 1 试剂2.1.1琼脂糖(电泳用）、0.9%生理盐水。2.1.2 抗原、标准阳性血清。2.2器材2.2.1 吸管、量筒、三角烧瓶、直径为90 mm平皿。2.2.2·水平台、天平、金属打孔器、可调式微量移液器及吸头。2.2.3模板纸：中间一个孔周围六个孔，孔径为4 mm;孔间距(边缘)均为3mm。2.3被检血清无菌采血，分离血清，4℃暂存或冰冻保存。3操作方法3.1琼脂平板的制备取琼脂糖1g，0.9%生理盐水100mL，加人三角烧瓶，在水浴中充分煮沸融化，或115℃10min压,冷却至 56℃左右,将洁净干热灭菌的平皿置于水平台上，每个平Ⅲ加20 mL(厚度 3mm),加盖凝固后，把平Ⅲ倒置，防止水分蒸发，放4℃冷藏保存。3.2打孔反应孔现用现打，从冰箱中取出琼脂凝胶板，放在模板纸上，照图案在固定位置上，立即用金属打孔器打孔，将孔中的琼脂柱用针头轻轻挑出或吸出，勿伤边缘。3.3加样制好孔型的平皿写上日期及编号，用可调式微量移液器加样。使用图1时，“G”孔加抗原，使用图2时，在中央孔加抗原，“十”孔加标准阳性血清，其他孔均加被检血清。每孔均以加满不溢出为度，每加-…个样品应换一个吸头。然后将琼脂板放人有湿纱布的带盖湿盒内，置室温（20℃～25℃）使之扩散和反应。1 SN/T 1357—200413)+) G (21) (22)图 100④@④00图 23.4观察于 24 h初判,48 h终判,判定时借助观察灯或自然光源。4结果的判定4.1当标准阳性血清孔与抗原孔之间在 24 h内形成清晰、致密、单-的沉淀线时,本试验成立,否则本次试验无效须重做。4.2如果被检血清孔与抗原孔间形成沉淀线，且与标准阳性血清孔和抗原孔间形成的沉淀线末端完全融合，则判为阳性(见图 3)。00可由?Q图 34.3如果被检血清孔与抗原孔间无沉淀线出现，但标准阳性血清孔与抗原孔间形成的沉淀线末端在被检血清孔与抗原孔间向抗原孔侧弯曲，则判为弱阳性。应重复试验，仍为弱阳性者判为阳性（见图 4）。00④[@]00图4 SN/T 135720044.4如果被检血清孔与抗原孔间形成的沉淀线和标推阳性血清孔与抗原孔之间所形成的沉淀线交叉，则为非特异性沉淀线，应重新试验，仍出现非特异性沉淀线者判为阴性(见图5)。00lO00图 54.5如果被检血清孔与抗原孔间无沉淀线出现，标准阳性血清孔与抗原孔形成的沉淀线末端直伸向被检血清孔则判为阴性(见图 6)。00??00图 6 L/NS中华人民共和国出人境检验检疫行业标准茨城病免疫琼脂扩散试验方法SN/T 1357—2004中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16　印张0.5字数 6千字2004年10月第一版　2004年10月第一次印刷如有印装差错由本社发行中心调换版权专有　侵权必究举报电话：（010N/T1357-2004