SN_T 3948-2014化学品 体外皮肤刺激：重组人表皮试验.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3948—2014化学品体外皮肤刺激：重组人表皮试验Chemical---In vitro skin irritation--Reconstructed human epidermis test method2014-11-01实施2014-04-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局真 SN/T 3948—2014#言前本标准按照GB/T 1.1--2009给出的规则起草。本标准技术性内容与经济合作与发展组织(OECD)化学品测试方法 439《体外皮肤刺激：重组人表皮试验》(In vitro skin irritation:reconstructed human epidermis test method)(2010)内容一致。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局本标准主要起草人：姚丽芳、陶海华、李宁、缪文彬、蒋伟、李蔚、朱洪坤、赵颐晴、郑华。 SN/T 3948---2014化学品体外皮肤刺激：重组人表皮试验范围1本标准规定了化学品体外皮肤刺激重组人表皮试验的试验原则、试验步骤及数据和报告。本标准适用于联合国全球化学品统一分类和标签制度（简称GHS)和欧盟物质和混合物分类、标签和包装法规（简称CLP)刺激性化学品类别2（刺激性化合物)的分类评估。本标准不适用于联合国 GHS类别3(轻微刺激物)的分类评估。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T27830--2011化学品　体外皮肤腐蚀　人体皮肤模型试验方法3术语和定义GB/T27830-2011界定的以及下列术语和定义适用于文本件。3.1细胞活性cell viability测定细胞群总体活力的指标如细胞线粒体脱氢酶还原活性染料噻唑蓝（3-（4，5-二甲基噻唑-2)2,5-二苯基四氮唑溴盐，MTT)（CAS No.298-93-1)的能力},指标的测定取决于试验终点和所用的设计方案，并与细胞总数和/或活性细胞数量有关。［GB/T 27830—2011,定义2.2］3.2半数有效时间median effective time;ETso一定浓度下，导致细胞活性降低 50%所需要的时间。3.3半数抑制浓度half maximal inhibitory concentration;IC5o一定暴露时间下,导致细胞活性降低 50%时的浓度。3.4皮肤刺激skin irritation接触受试物 4 h 后,引起的皮肤可逆性损伤。皮肤刺激是种局部的非免疫源性反应,在受到刺激后较短时间内就会发生。主要特点为可逆的,包括炎症反应，以及与炎症进程相关的刺激临床症状(红斑、水肿、痒和疼痛）。3.5光密度 optical density;OD入射光强度与透射光强度之比值的常用对数值。表示被检测物吸收的光学密度。特定波长下，同-种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。1 SN/T 3948—20144试验原则4.1本标准基于重组人表皮模型,最大程度模拟人类皮肤表层部分，即表皮的生化和生理特征。重组人表皮模型可以自已构建或通过商业途径获得。该模型是由人类非转化表皮角质形成细胞经培养形成的一个多层的、高度分化的三维重组人表皮模型。它包括基底层、荆棘层、颗粒层和多层角质层。角质层含有细胞间的薄的脂质层，其代表体内主要的脂质层。重组人表皮测试方法可以检测炎症反应的启动过程。4.2重组人表皮模型中细胞活性可通过 MTT法检测得到。MTT法是根据活性细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶将 MTT染料[3-（4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐］还原为水不溶性的蓝色结晶甲麟的原理，通过检测甲含量检测细胞活性。如果细胞活性低至临界值则判断为刺激性化合物,细胞活性高于临界值的化合物为非刺激性化合物。4.3本标准包括三个经验证的测试方法，即：重组人表皮模型EpiSkinTM测试方法、重组人表皮模型EpiDermTMSIT(EPI-200)和 SkinEthicTM测试方法。4.4在使用三个经验证的测试方法之前,实验室应根据附录 A的要求进行性能验证。5试验步骤5.1评价重组人表皮模型5.1.1重组人表皮模型总条件重组人表皮模型多层内皮细胞(基底层、荆棘层和颗粒层)外应有一层功能性角质层。角质层应含有多层重要的脂质层，能抵制标志性细胞毒性化合物如：十二烷基磺酸钠(SDS)或 Triton X-100 快速渗透。重组人表皮模型的封闭特性应能阻止角质层周围的化合物进入活性组织。重组人表皮模型不能有细菌、病毒、支原体或真菌污染。5.1.2活性采用 MTT法检测细胞活