SNT 2035-2007甜菜霜霉病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2035—2007甜菜霜霉病菌检疫鉴定方法Identification of Peronospora farinosa (Fr. )Fr.f. sp. betea Byford2007-12-24 发布2008-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局素摄 100盘数码防伪 SN/T 2035—2007前言本标准的附录 A、附录 B、附录 C、附录 D均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：杨立群、张洪祥、孟玉芹、刘洪义、于恒纯、齐俊杰。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2035—2007甜菜霜霉病菌检疫鉴定方法1 范围本标准规定了植物检疫中甜菜霜霉病菌的检疫和鉴定方法，本标准适用于甜菜、甜菜种子、甜菜种苗中甜菜霜霉病菌的检疫和鉴定。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准2. 1菌丝hyphae大多数真菌在生长过程中产生茂盛分枝的管状细丝，条管状细丝称菌丝，真菌的结构单位。多条菌丝聚集在一起称菌丝体。2. 2孢囊梗sporangiophore从营养菌丝分化出着生孢子囊的分枝或不分枝的菌丝2.3孢子囊sporangia孢子囊由菌丝分化成孢囊梗的顶端膨大而成的囊状物，是霜霉目等真菌的无性繁殖结构。2. 4卵孢子.oospore真菌中卵菌从受精的卵球发展成的休眠孢子3 原理甜菜霜霉病菌［Peronospa farinosa(Fr.)Fr.f. sp.betga Byford],属于假菌界（Chromista),卵菌门（Oomycota)，霜霉目（Perorosporales)，霜霉科(Peronospbraeae），霜霉属（Peronospora）。该病菌具有孢囊梗、孢子囊和卵孢子(参见附录 A）。甜菜霜霉病菌是专性寄生菌，寄主是甜菜属植物，在世界上的分布参见附录B,是甜菜生产上的危险性病害。该病菌主要侵染幼苗，苗期发病可引起死秧，两年生甜菜感病后，不能抽出花苔或抽出很短，最终很少结实或不结实枯死。该病菌以卵孢子和菌丝形式寄生在甜菜的叶片和甜菜母根上，母根甜菜和田间病残体可提供越冬的菌源，种子可被卵孢子和菌丝污染。病菌的远距离传播主要是通过种子或母根的调运，近距离传播主要是病残体和寄主上产生的孢子囊。该病菌在寄主上的危害症状及病原菌的形态特征是鉴定该病菌的主要依据。仪器及用具44.1仪器体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、高压灭菌、光照恒温培养箱、电子天平（1/1000）、冰箱、振荡器、离心机。4.2实验用具三角瓶（250mL、500mL）、培养皿（9cm）、烧杯（50mL、100mL、500mL）、剪刀、解剖针、解剖刀、滤纸、离心管、透明胶带、吸管(刻度)或可调加样器等。 SN/T 2035--20075 实验试剂吐温-20、席尔氏溶液（参见附录C)。6现场检查主要是针对进境种子和种苗。甜菜种子取样时注意检查种子中是否有可疑病粒，种子中是否含有甜菜植株的病残体;植株检查时看是否有发病的可疑病株，将每一可疑病株挑出或采下单独装塑料袋中，送到实验室做进一步检验鉴定。7 实验室检验7.1普通种子检验7.1.1洗涤检验每份送检样品充分混匀，从样品中取50g作为检验样品。将称取的样品放入灭过菌的250mL三角瓶中，加人无菌水150mL,再加1滴～2滴吐温-20，用胶塞或封口膜将三角瓶封口，以每分钟260次的频率振荡5min，然后立即将振荡的悬浮液倒人灭菌的离心管，以1500r/min离心3min，倒出上清液，在沉淀物中加人席尔氏液数滴，约1mL。然后镜检，至少检查10个载玻片，观察有无卵孢子、孢囊梗和孢子囊。7.1.2保湿培养检验将抽取的样品倒入灭菌瓷盘中，检查病残体和可疑的病粒、癌粒，然后用灭过菌的镊子在无菌的情况下将其放入灭过菌的培养皿中（培养血中放人三层滤纸，然后高压灭菌，冷却后待用)，在培养皿内加人3mL无菌水，每皿放种子30粒左右，共10皿，将培养皿封闭在透明塑料袋中或用透明胶条封口，在16℃～18℃条件下光暗交替培养5d后，用体视显微镜观察孢囊梗形态特征和孢子囊萌发。7.2种衣剂种子检验7.2.1直接保湿培养检验将带有药包衣的种子不经过任何处理直接放人灭过菌的培养血中,方法同7.1.2。7.2.2洗涤后保湿培养取样品50g放在500mL的三角瓶中加400mL无菌水振荡10min，倒出清洗液，然后重复冲洗3次，包衣洗掉，用灭过菌的镊子在无菌条件下挑出癌粒、小粒、可疑粒，并切开放人灭菌的培养皿中，方法同7.1.2。7.3进境种苗检验7.3.1直接镜检采集带有霉层的病叶，可直接用灭菌解剖针挑取霉层，或者用透明胶带直接粘取霉层后镜检，观察孢囊梗形态特征，孢子