SC_T 7016.7-2012鱼类细胞系 第7部分：棕鮰细胞系(BB).pdf

ICS 65.150B 50Sc中华人民共和国水产行业标准SC/T 7016.7—2012鱼类细胞系第7部分：棕细胞系（BB）Fish cell lines-Part 7 :Brown bullhead cell line (BB)2012-12-07 发布2013-03-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7016. 7-2012前言SC/T 7016《鱼类细胞系》分为下列部分：-第1部分：胖头够肌肉细胞系（FHM)；-第2 部分:草鱼肾细胞系(CIK);—-第3部分:草鱼卵巢细胞系(CO);—第 4 部分:虹鳟性腺细胞系(RTG-2);第5部分:鲤上皮瘤细胞系(EPC);第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE);第7部分：棕纲细胞系(BB);?-第8部分:斑点叉尾卵巢细胞系(CCO);第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2);一第10 部分：狗鱼性腺细胞系(PG);-第 11部分:虹肝细胞系(R1);第12部分：鲤白血球细胞系(CLC);本部分为SC/T7016的第7部分。本部分按照GB/T 1.1给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：高隆英、陈爱平、张利峰、王姝、沈锦玉、李乐。 SC/T 7016. 7—2012鱼类细胞系第7部分：棕细胞系（BB)1范围本部分描述了棕细胞系(brown bullhead cell line,BB)的形态、传代培养条件、生长特性、针对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于棕细胞系的培养、使用和保藏。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义3. 1棕细胞系brown bullhead cell line， BBCerini C.P.和 Malsberger R.G．1962 年从棕（Ictalurus nebulosus）的结缔组织和肌肉细胞经原代培养、衍生的连续细胞系。4细胞的形态、大小与特性4.1形态为上皮样细胞(参见图A.1)。4.2　大小经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约16.10μm，其中最大量细胞的峰值直径约14. 27 μm(参见 B. 2)。4.3特性4.3.1生长特性贴壁生长。4.3.2对部分水生动物病原的敏感性BB主要对斑点叉尾病毒(Channel catfish virus，CCV）敏感，接种后的 CPE形态参见图 A.2。5主要材料与仪器设备5.1 水应符合 GB/T 6682 中级水的规定。5.2细胞培养液主要成分见C.1。5.3细胞消化液主要成分及其含量见C.2。1 SC/T 7016. 7—20125.4 血清胎牛血清。5.5仪器设备主要包括：生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备倒置显微镜;一一血球计数板或电子细胞计数仪；一细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件6.1培养温度细胞置于生化培养箱内，在15℃～27℃下培养，最适生长温度为25℃。6. 2 培养液 pH7.2~7.6。7 细胞传代与保藏7.1传代程序7.1.1吸弃旧培养液置于超净工作台内，无菌环境下吸弃长满单层BB细胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2　消化细胞用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加入细胞消化液，一般在50mL细胞培养瓶中加人5mI.左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.1mL～0.2mL,加入量必须完全浸没细胞层。贴壁长满的BB消化时间-般为2min～4min，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养瓶以分散细胞。7.1.3更换细胞培养液与分瓶将消化液吸弃后,在50mL细胞培养瓶中,加入10 mL～15mL细胞培养液(C.1),按每瓶5ml.分成2瓶～3瓶,使细胞终浓度达到1×105个/mI。分瓶后在25℃培养8h内细胞贴壁并生长；18h后能基本长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶,按培养面每平方厘米加人0.1mL～0.2ml.的细胞培养液。7.1.4细胞的传代周期细胞长满单层并在5d后再次传代较好。7.2细胞的保藏7.2.1保藏条件7. 2. 1.1 温度与天数传代后的BB经25℃24h的培养后，移人生化培养箱15℃或20℃保藏。在15℃下可保存30d以上,20℃下可保存20d左右。7. 2. 1. 2 保藏液 pH7.2~7.6。7.2.2液氮冻存保种也可在液氮中冻存。细