SN_T 2566-2010食品中霉菌和酵母菌的计数 PetrifilmTM测试片法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2566-—2010食品中霉菌和酵母菌的计数PetrifilmTM测试片法Enumeration of mould and yeast in foods-PetrifilmTM yeast and mold count plate method2010-05-27发布2010-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防商 SN/T 2566--2010前言本标推按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标推由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标推起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、大连启源科技发展有限公司、3M中国有限公司。本标准主要起草人：刘淑艳、卢行安、曹际婿、郑秋月、蒋丹、宋惠君、徐君怡、马惠蕊、王秋艳、王刚、赵昕、齐震玉、徐杨、陈畅、王海燕、周振亚。 SN/T 2566—2010食品中霉菌和酵母菌的计数PetrifilmTM测试片法范围1本标准规定了食品中霉菌和酵母菌的PetrifilmTM测试片计数方法。本标准适用于食品中体菌酵母菌的检验计数2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少附。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室生物安金通用要求3原理PetrifilmTM酵母菌和菌PetrifilmYeastandMioid，PYMf)测试片是一种预先制备好培养基的霉菌和酵母菌计数碟片。培养基中含有作为载体的冷水可溶性凝胶和对酵母菌和霉菌敏感的5-漠4-氯-3吲哚基-磷酸盐指示剂，以及抑制细菌生长的四环索、氮霉紊。圆形生长区域中划分为30个1cm×1cm便于计数的方格。4术语和定义下列术语和定义适用于体文件4. 1霉菌和酵母菌moldandiyeast霉菌系以孢子、分生孢子或菌丝片断进行播的形贼菌丝体的微小真菌；酵母菌系主要靠发芽无性繁殖的单细胞真菌。5设备和材料5. 1恒温培养箱：25℃～28℃。5.2冰箱:0℃~4℃。5.3均质器（旋刀式或拍击式)或等效的设备。5.4无菌吸管1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或电子移液器。5.5PetrifilmM测试片压板。5.6振荡器。PetrifilmTM酵母菌和链菌测试片由美国3M公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使1)用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。1 SN/T2566—20105.77天平：感量0.1g。6培养基和试剂6.1PetrifilmTM酵母菌和霉菌测试片。6.2稀释液6.2.1Butterfields磷酸盐缓冲液：见附录A第A.1章。%蛋白陈水：见附录A第A.2章。A检验程序检验程序见图1。检样25g(mL)+225mL稀释液均质2 min10倍增稀释液选择2个~3个适宜稀释度，各取1mL分别加入PYM测试片压板置于中央处，轻压静置至少1min25 ℃~28 ℃3 d~5 d霖菌计数酵母菌计数报告图1霉菌与酵母菌的检验程序8操作步骤8.1检验样品的制备8.1.1冷冻样品的解冻检验前冷冻样品可于2℃～5℃解冻，时间不超过18h，或在不超过45℃的温度中解冻，时间不超过15min。2 SN/T 2566—20108.1.2样品匀液的制备固体食品以无菌操作取25g样品，放人装有225mL稀释液（Butterfields磷酸盐缓冲液或0.1%蛋白陈水）的无菌均质杯内，于8000r/min均质2min，制成1：10样品匀液，或放人225mL稀释液的无菌均质袋中，用均质器拍打2min，使霉菌孢子充分散开，制成1：10的样品匀液。液体食品取原液予以检测或以无菌吸管吸取样品25mL，放入装有225mL稀释液的无菌玻璃瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠）中，以30cm幅度、于7s内振摇25次（或以机械振荡器振摇），制成1：10的样品匀液。8.2样品匀液的接种和培养8.2.1稀释对上述样品匀液做10倍系列梯度稀释，根据样品的污染程度，选择适宜的2个～3个连续稀释度，每个稀释度接种2张PYM测试片。8.2.2接种将PYM检验测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用吸管吸取1mL样液垂直滴加在测试片的中央，允许上层膜直接落下，但切勿向下滚动上层膜。手拿压板横杆，将压板放置在上层膜中央处，平稳的压下，使样液均勾覆盖于圆形培养面积上，切勿扭转压板。拿起压板，静置至少1min以使培养基凝固。8.2.3培养将测试片的透明面朝上置于培养箱内，堆叠片数至多不能超过20片，25℃～28℃培养3d～5d。9结果计算与报告9.1判读9.1.1培养3d后持续观察计数，可目测、显微镜来计数；如果培养5d后，测试片上目标菌生长过