NY_T 1798-2009植物油脂中磷脂组分含量的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.200X 14NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1798--2009植物油脂中磷脂组分含量的测定高效液相色谱法Determination of phospholipids in vegetable oil by HPLC2009-12-22 发布2010-02-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1798—2009前言本标准由农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：李培武、王秀嫔、张文、汪雪芳、陈小媚、丁小霞、谢立华、周海燕。 NY/T 1798—2009植物油脂中磷脂组分含量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了高效液相色谱法（HPIC法）测定大豆油、菜籽油、花生油、葵花籽油中磷脂组分和含量的方法。本标准适用于大豆油、菜籽油、花生油、葵花籽油中磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)的测定。本标准磷脂酰胆碱（PC)、磷脂酰乙醇胺（PE)和磷脂酰肌醇（PI)方法检出限分别为：0.12mg/g0. 38 mg/g 、0. 75 mg/g c本标准磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺（PE)和磷脂酰肌醇（PI)线性范围分别为0.08mg/mL~8.00 mg/mL.0.15 mg/mL~15.00 mg/mL.0.30 mg/mL~30.00 mg/mL。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T5524动植物油脂扦样GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理油脂试料用氯仿溶解提取，氨基固相萃取柱纯化，高效液相色谱分离，外标法定量。4试剂除非另有说明，均使用分析纯试剂；水为GB/T6682规定的二级水。4.1氯仿(CHCls）。4.2 乙酸(CH:OOH)。4.3乙酸铵(CHCOONH4)。4. 4 乙醚(CH:CH2OCH2CHs)。4.5甲醇(CH:OH),色谱纯。4.6正已烷(C.H14），色谱纯。4.7异丙醇［（CH:）2CHOHI，色谱纯。4.8乙酸-乙醚混合溶液(2+144=V+V）：取乙酸（4.2)和乙醚（4.4)混合。4.9氯仿-异丙醇混合溶液（2十1=V+V)：取氯仿（4.1)和异丙醇(4.7)混合。4.10正已烷-异丙醇混合溶液(1+1=V+V)：取正已烷(4.6)和异丙醇(4.7)混合。4.11乙酸铵水溶液（0.025mol/L）：称取1.925g乙酸铵（4.3），用一级水溶解并定容到1000mL。4.12磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇标准品，纯度95%。4.13磷脂标准储备溶液（10mg/mL）：准确称取磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）和磷脂酰肌醇(PI)各100mg（精确至1mg），用正已烷-异丙醇混合溶液（4.10）溶解并定量至10mL，制备成10mg/mL的标准储备溶液。该标准储备溶液在4℃下，可以稳定储藏3个月。1 NY/T 1798--20095仪器设备5.1分析天平：感量0.1mg。5.2具塞离心管：100mL。5.3漩涡混合器。5.4真空旋转蒸发仪：转速为10r/min～120r/min。5.5氨基固相萃取柱：6mL,1000mg或性能相当者。5.6离心机：转速至少为4000r/min。5.7液相色谱仪：带有紫外检测器；色谱柱：正相硅胶柱Si60-55μm，250mm×4.6mm或性能相当者。6试样制备按GB/T5524进行扦样和分样，分取50g试料，装入样品瓶备用。7 分析步骤7.1提取净化准确称取油脂试料4g（精确至1mg），置于100mL具塞试管（5.2)中，加人50.0mL氯仿（4.1），漩涡混合。先用1.0mL氯仿（4.1)活化氨基固相萃取柱（5.5），将10.0mL油脂氯仿溶液移入氨基硅胶固相萃取柱中，然后依次用2.0mL氯仿-异丙醇混合溶液（4.9）和3.0mL的乙酸-乙醚混合溶液（4.8）洗脱小柱，弃去洗脱液，然后用3.0mL甲醇（4.5）洗脱出磷脂，再重复四次，并收集到的15.0mL甲醇溶液集中，Nz吹于，加入10.0mL正已烷-异丙醇混合溶液（4.10）溶解，在4000r/min下离心5min，取上清液用于液相色谱分析。7.2色谱分析取磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)标准储备溶液（4.13)用正已烷-异丙醇混合溶液（4.10）稀释至0.05mg/mL、1.00mg/mL、2.00mg/mL、3.00mg/mL和4.00mg/mL标准工作溶液，连同样品依次进样，