SNT 1870-2007食品中致病菌检测方法 实时PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1870—-2007食品中致病菌检测方法实时 PCR 法Detection of pathogens in food --- Real-time PCR Method2007-04-06 发布2007-10-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1870—2007前 言本标准的附录 A、附录 B均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标主要起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、深圳太太基因工程有限公司、中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局、中华人民共和国汕头出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准主要起草人：曹际娟、卢行安、肖性龙、李苏龙、孙杰、李丽、许业莉、顾鸣、谢昭聪、朱海、张经纬。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 1870—2007食品中致病菌检测方法实时 PCR 法范围1本标准规定了食品中沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、空肠弯曲菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157：H7、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌的实时PCR检测方法。本标准适用于食品中沙门氏菌志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、空肠弯曲菌、肠出血性太肠埃希氏菌O157：H7、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌的快速检测。规范性引用文件2下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标推的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。丸是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB 19489实验室生物安全趣用要求SN 0170出口食品中沙门氏菌检验方法SN 0172出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法SN 0173出口食品中副溶血性孤菌检验方法/SN 0174出口食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法SN 0175出口食品中空肠弯曲菌检验方法|SN/T0184.1进出口食品单核细胞增生李斯特氏菌检验方法SN/T0973进出口肉及肉制品中肠出血性大肠杆菌O157H7检验方法SN/T1022　出口食品中霍乱弧菌检验方法NMKL No.156食品中致病性弧菌的检测和计数3定义、术语和缩略语下列定义、术语和缩略语适用于本标准。3.1定义和术语3.1. 1实时荧光 PCR real-time fluorescent PCR实时荧光聚合酶链式反应。3. 1.2Ct 值 cycle threshold Ct每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。3.2缩略语3. 2. 1PCR polymerase chain reaction聚合酶链反应,简称 PCR。 SN/T 1870—20073.2.2DNA deoxyribonuleic acid脱氧核糖核酸。3.2.3 deoxyribonucleoside triphosphatedNTP脱氧核苷酸三磷酸。3.2.4dATP deoxyadenosine triphosphate脱氧腺苷三磷酸。3.2.5dCTP deoxycytidine triphosphate脱氧胞苷三磷酸。3.2.6dGTP deoxyguanosine triphosphate脱氧鸟苷三磷酸。3.2.7dTTP deoxythymidine triphosphate脱氧胸苷三磷酸。3.2.8dUTP deoxyuridine triphosphate脱氧鸟苷三磷酸。3.2.9UNG uracil N-glycosylase尿嘧啶 N-糖基化酶。3.2. 10Taq Thermus aquaticu水生栖热菌。3.2.11Tristris (hydroxymethyl) aminomethane三(羟甲基)氨基甲烷。3.2. 12FAM 6-carboxyfluorescein6-羧基荧光素。3.2. 13 6-carboxytetramethylrhodamineTAMRA6-羧基四甲基罗丹明。4　测定方法4.1方法提要在 PCR基础上，加人一条与模板 DNA匹配的、两端有荧光基团标记的寡核苷酸探针。PCR每进行一次循环,合成的新链数与释放的荧光基团数呈对应关系，即PCR产物的量与荧光信号的强度呈对应关系。当荧光信号超过所设定的阈值(Threshold-value)时，荧光信号可被检测出来，仪器检测荧光基团的增加量可以间接地体现目的片段的扩增量。2 SN/T 1870—--2007样品的模板DNA进行实