SN_T 3486-2013虾细菌性肝胰腺坏死病检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3486--2013虾细菌性肝胰腺坏死病检疫技术规范Quarantine protocol for necrotizing hepatopancreatitis of shrimp2013-03-01 发布2013-09-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局意梦 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准虾细菌性肝胰腺坏死病检疫技术规范SN/T 3486--2013*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址 www. spc. 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/165印张1字数 26千字2013年8月第一版2013年8月第一次印刹印数 1-1 600* 书号：155066·2-25863 SN/T 3486—2013前言本标准按照GB/T1.1一2009的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：郑晓聪、王群、何俊强、史秀杰、兰文升、贾鹏、王津津、叶奕优、王红英、陈兵、于力、刘。I SN/T 3486—2013虾细菌性肝胰腺坏死病检疫技术规范1范围本标准规定了虾细菌性肝胰腺坏死病的组织切片、聚合酶链式反应和斑点杂交等方法。本标准适用于虾细菌性肝胰腺坏死病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方医GB/T18088出人境动物检疫采样3疫病概述虾肝胰腺坏死病（Necrotizingthepatopancrcatitis；NHP）是由肝胰腺坏死性细菌（Necrotizinghepatopancreatitis bacterium;NHPB)引起的对虾疾病。肝胰腺坏死性细菌是一种革兰氏阴性菌，大小约为0.25 μm×0.9 μm,多形态,专性细胞内寄生。(参见附乘 A)4缩略语下列缩略语适用于本文件。DIG：地高辛(Digoxigenin)NHP:虾细菌性肝胰腺坏死病(Necatitis)hepatopancrNHPB:虾肝胰腺坏死性细菌(Necrotizing hepatopancreatitis bacterium)PCR:聚合酶链式反应(Polymchain rcaction)5试剂和材料5.1若非注明，本标准所用生化试剂均为分析纯的试剂。5.2若非注明,实验用水应符合 GB/T 6682一级水的规格。5.3 甲醛。5.4 冰醋酸。5.5 石蜡。5.6 二甲苯。5.7 对苯二酚。5.8柠檬酸。5.9 硝酸银。5. 10乙醇。 SN/T 3486—20135.11 中性树胶。5. 12蛋白酶 K。5. 13Tris 饱和酚。5.14三氯甲烷。5.15异戊醇。5.16Taq 酶、dNTPs(含dATP、dTTP、dGTP、dCTP)、MgSO,、PCR 缓冲液(不含Mg*+）和溴酚蓝等试剂可选用专业试剂公司提供的商品化试剂。5.17引物序列如下：NHPF.:5-CGTTGGAGGTTCGTCCTTCAGT-3NHPR:5-GCCATGAGGACCTGACATCATC-3F27:5-ACATGCAAGTCGAACGCAATAGG-3R235:5-ACAGATCATAGGCTTGGTAGGCTG-35.18　标准分子量：推荐使用100 bpDNAMarker。5.19 琼脂糖。5.20PCR产物纯化试剂盒。5.21地高辛（DIG)标记试剂盒。5.22封闭剂（blocking reagent)。5.23碱性磷酸酶标记的DIG抗体。5.24四氮唑蓝（NBT）。5.2555-溴-4-氯-3-吲哚磷酸-甲苯胺盐（BCIP）。5.26二甲基甲酰胺(DMF)。6器材和设备6.1切片机。6.2显微镜。6.3 水浴锅。6.4恒温箱。6.5纯水器。6.6普通冰箱和超低温冰箱。6.7 台式离心机。6.8 组织匀浆器。6.9PCR扩增仪。6.10水平电泳仪。6.11 微量移液器。6. 12紫外观察灯或凝胶成像仪。7临床症状NHP的症状包括摄食减少、空肠、软壳、游动无力、体表挂脏、黑腮等对虾疾病的常见症状。典型症状表现为在泳足的基部发生溃烂或是黑化，以及肝胰腺明显萎缩。感染对虾的肝胰腺萎菱缩后变得苍白·而正常的虾则为棕色或桔黄色。感染严重时，肝胰腺腺管黑化，外观上可见肝胰腺上形成黑色带。2 SN/T 3486—20138组织病理学检