SN_T 1135.13-2015马铃薯Y病毒检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1135.13—2015马铃薯Y病毒检疫鉴定方法Detection and identification of Potato virus Y2015-12-04发布2016-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1135.13—2015前言SN/T1135共分为13部分：第1部分：马铃薯癌肿病检疫鉴定方法；第2部分：马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法；第3部分：马铃薯帚顶病毒检疫鉴定方法；-第4部分：马铃薯黑粉病菌检疫鉴定方法；第5部分：马铃薯环腐病菌检疫鉴定方法；第6部分：马铃薯排腐病菌检疫鉴定方法；-第7部分：马铃薯A病毒检疫鉴定方法；第8部分：马铃薯坏疽病菌检疫鉴定方法；第9部分：马铃薯青枯病菌检疫鉴定方法；第10部分：马铃薯V病毒检疫鉴定方法；第11部分：马铃薯皮斑病菌检疫鉴定方法；第12部分：马铃薯M病毒检疫鉴定方法；第13部分：马铃薯Y病毒检疫鉴定方法。本部分为SN/T1135的第13部分，本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局。本部分主要起草人：刘洪义、刘忠梅、张永江、李桂芬、王宏毅、魏梅生、周志强、张洪祥、杨立群。1 SN/T1135.13—2015马铃薯Y病毒检疫鉴定方法1范围SN/T1135的本部分规定了马铃薯Y病毒（PotatoirusY)的检疫鉴定方法。本部分适用于可能带有马铃薯Y病毒的马铃薯植株、繁殖材料及其他寄主植物的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB7331马铃薯种薯产地检疫规程SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3马铃薯Y病毒基本信息学名：Potato virus Y缩写:PVY异名 :Potato severe mosaic virus, Potato acropetal necrosis virus, Solanum virus 2, Tobacco vein-banding virus, Potato leafdrop streak virus, Tobacco veinal necrosis virus,Potato virus 20。分类地位：马铃薯Y病毒科（Potyuiridae），马铃薯Y病毒属（Potyvirus）。传播途径：马铃薯种薯传毒，机械接种可传毒，多种蚜虫以非持久性方式传播该病毒。远距离传播通过种薯贸易完成。马铃薯Y病毒的其他信息参见附录A。4方法原理PVY的基因组特征、免疫原性和在寄主植物上的症状特征是该病毒检疫鉴定的依据。依据PVY及主要株系的基因组特征建立RT-PCR、实时荧光RT-PCR(Real-timePCR)检测方法；依据PVY及主要株系的免疫原性建立酶联免疫吸附（ELISA）方法、胶体金免疫试纸条方法和免疫电镜方法：依据PVY及主要株系在不同寄主植物上的症状特征建立鉴别寄主诊断法；通过这些方法的有效组合，判断样品是否带有PVY及主要株系。5仪器设备、用具及试剂5.1仪器设备酶标仪、PCR仪、实时荧光PCR仪、电泳仪、生物安全柜、小型离心机、台式冷冻离心机、水浴锅、凝胶成像系统、制冰机、超低温冰箱、常规冰箱、电子天平、涡旋振荡器、组织捣碎机、恒温培养箱等。5.2用具可调移液器(0.1μL～2.5μL,2μL～20μL,10μL～100μL,20μL～200μL;100μL～1000μL)和1 SN/T 1135.13—2015可调移液器头、离心管、研钵、微型磨杆。5.3试剂双抗体夹心酶联免疫吸附测定所需试剂见附录B，免疫层析试纸条检测所需试剂见附录C,RT-PCR检测所需试剂见附录D,实时荧光RT-PCR检测所需试剂见附录E。6样品的抽取及制备6.1抽样马铃薯贸易商品或科研用薯材料或国际间种质交流材料等现场抽样按照SN/T2122的规定执行，田间调查采样按照GB7331的规定执行。6.2脱毒苗、微型薯、块茎等样品的制备将脱毒苗、微型薯、块茎播于非土介质或灭菌土中，于25℃左右生长并进行症状观察。待长出3片～4片真叶后将表现症状的植株单独编号，未表现症状的植株分组（10株为1组)并编号。6.3茄科等寄主植物种子样品的制备将种子（重点挑取畸形、不成熟的种子)播于灭菌土中，于25℃左右生长并进行症状观察。待长出3片～4片真叶后将表现症状的植株单独编号，未表现症状的植株分组（10株为1组)并编号。7实验室鉴定7.1酶联免疫吸附