NY 918-2004饲料中雌二醇的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 918-2004饲料中雌二醇的测定高效液相色谱法Determination of estradiol in feed--High-pressure liquid chromatography2005-02-01实施2005-01-04发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 918—2004前 言本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（沈阳）、国家饲料质量监督检验中心（北京)。本标准起草人：张建勋、曹东、董永亮、苏晓欧、田颖、李雪兰、孟庆文、李永才、田晓玲。 NY/T 918—2004饲料中雌二醇的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了以高效液相色谱仪(HPLC)测定饲料中雌二醇含量的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混料中雌二醇含量的测定，本方法检测限为1mg/kgo2 规范性引用文件下列文件的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T 6682—1992分析实验室用水规则和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法3原理用甲醇提取饲料中的雌二醇,取部分提取液过C18萃取柱,用水淋洗杂质,乙腈洗脱,以乙腈+水(40+60)为流动相,用高效液相色谱仪于280nm处检测。4试剂和溶液除特殊注明外,本法所用试剂均为分析纯。水应符合 GB/T 6682—1992—级水规定。4.1　乙腈色谱纯。4.2甲醇4.3雌二醇标准液4.3.1雌二醇标准贮备液：准确称取雌二醇(纯度≥98%)0.0250g,置于100mL容量瓶中,用甲醇溶解、定容,其浓度为250μg/mL的贮备液,置4℃冰箱中保存。4.3.2雌二醇标准工作液：分别准确吸取一定量的标准贮备液(4.3.1),置于容量瓶中,用甲醇稀释、定容,配成浓度为 2.5 μg/mL,5.0 μg/mL,10.0 μg/mL,12.5 μg/mL,15.0 μg/mL,20.0 μg/mL,25.0 μg/mL 的标准工作液。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪紫外检测器。5.2分析天平感量为0.0001g。5.3 天平感量为0.001g。5.4震荡器1 NY/T 918--20045.5玻璃具塞三角瓶250 mL.5.6 Ct萃取柱250 mg/mL.5.7微孔滤膜孔径0.45 μm。6试样制备按照GB/T14699.1方法采样，选取样品至少500g，四分法缩减至约200g，粉碎后过1mm孔筛，备用。7 测定步骤7.1提取与净化a）准确称取10g试样（精确至0.0001g),置于250mL玻璃具塞三角瓶中(5.5),准确加入50mL甲醇(4.2),震荡30 min;b）Ci8萃取柱使用前处理：加5mL甲醇,流完后加5mL水洗,不要挤于，则可以加样液;c）甲醇提取液过滤,取滤液1 mL～2 mL,加 3 mL水混合后,过 Ci8萃取柱(流速约 1 mL/min),用3mL水淋洗后,用1mL乙腈(4.1)洗脱,洗脱液供高效液相色谱分析。7.2HPLC 色谱条件色谱柱：Crg柱,柱长 200 mm,内径4.6 mm,粒径5 μm。流动相：乙腈(4.1)+水(40+60)。流动相流速：1.0mL/min。检测波长：280 nmo进样体积：20μL。7.3HPLC定量测定取标准工作液(4.3.2)作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。8 结果计算与表述8.1 试样中雌二醇的含量按式(1)计算：m 1X =(1)m式中:X—-试样中雌二醇的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);一试样色谱峰对应的雌二醇的质量,单位为微克(μug);m1--试样质量，单位为克(g)；m-稀释倍数。n8.2测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留至小数点后1位。9重复性同一操作者对同一试样平行测定结果的相对偏差不大于10%。2 002816L/XN中华人民共和国农业行业标准饲料中雌二醇的测定高效液相色谱法NY/T 918--2004**中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)（邮政编码：100026网址： )中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销***开本 880mm×1230mm 1/16印张0.5字数５千字2005年4月第1版2005年4月北京第1次印刷书号：16109·523印数：1～2000 册NY/T 918-2004