SCT 7203.3-2007对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程 第3部分：新鲜组织的T-E染色法.pdf

ICS 65.020.30B 41Sc中华人民共和国水产行业标准SC/T 7203.3—2007对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第 3部分：新鲜组织的T-E染色法Diagnostic Protocols for Hepatopancreatic Parvovirus Diseaseof Penaeid Shrimp-Part 3: T-E Staining Method With Fresh Tissue2007-09-01实施2007-06-14 发布中华人民共和国农业部发布 SC/T 7203.3—2007前言SC/T 7203《对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程》分为三个部分：-第1部分:PCR检测法；一第2 部分:组织病理学诊断法;一第3部分：新鲜组织的T-E染色法。本部分为SC/T7203的第3部分。本部分的附录A为规范性附录。本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会归口。本部分起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、全国水产技术推广总站。本部分主要起草人：黄健、杨冰、陈爱平、宋晓玲、史成银、杨丛海、魏琦。T SC/T 7203.3—2007对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第3部分：新鲜组织的T-E染色法1 范围SC/T 7203 的本部分规定了诊断对虾肝胰腺细小病毒病新鲜组织的T-E染色法的原理、试剂与材料、仪器设备、操作步骤和结果判定。本部分适用于在现场或实验室对感染对虾肝胰腺细小病毒（Hepatopancreatic Parvovirus,HPV)的对虾个体进行快速诊断。不适于对病毒的非感染性携带的标本进行诊断以及对宿主进行组织病理学评价。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。SC/T 7202.1一2007斑节对虾杆状病毒病诊断规程　第1部分:压片显微镜检查法SC/T 7203.2一2007 对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程 第 2 部分:组织病理学诊断法3原理3.1对虾肝胰腺细小病毒病的病原和病理学特征见 SC/T 7203.2-2007 (对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第 2 部分:组织病理学诊断法)中 3.1的规定。3.2技术原理台盼蓝含有一个弱碱性基团和一个强酸性基团,其弱碱性基团可与核酸相结合,而强酸性基团的存在，使台盼蓝与弱酸性染料伊红互混而不发生沉淀。因此，台盼蓝与伊红的混合液既能一次性地使新鲜组织的细胞核染上蓝色，又能将细胞质染上红色。4　试剂和材料4.1除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水。4.2T-E染色液按附录 A的规定执行。5仪器设备5.1 解剖刀。5.2 尖头镊子。5.3 医用剪刀。5.4载玻片。5.5盖玻片。5.6光学显微镜：带高倍镜(40×)和油镜(100×)。5.7 吸水纸。11 SC/T 7203.3—20075.8 滴管。6检测步骤6.1采样样品采集要求见SC/T 7202.1一2007（斑节对虾杆状病毒病诊断规程第1部分：压片显微镜检查法)附录 B。6.2样品处理对虾糠虾幼体取3尾～5尾活体,在载玻片上用解剖刀整体切碎；仔虾及体长小于3cm的幼虾,取其头胸部,在载玻片上用解剖刀切碎；对虾体长大于3cm时，揭开其头胸甲，以尖头镊子取出一小块肝胰腺组织,在载玻片上撕碎涂抹,稍晾干。6.3染色在组织浆上滴加2滴 T-E染色液,混匀,常温放置染色3min～5min。6.4制片观察盖上盖玻片,再覆上数层吸水纸,轻压以吸去多余染液，除去吸水纸，在高倍镜或油镜下观察。7 结果判定7.1正常的对虾肝胰腺细胞经 T-E染色,可观察到肝胰腺细胞呈球形,形态较大;细胞质较肥大,为红色；细胞核较圆，为蓝到紫色；核内着色均匀，可见染色质和核仁；细胞质易破碎，有些只可见到蓝色的裸露细胞核。7.2感染 HPV 的对虾肝胰腺细胞核内,包涵体多呈圆形或卵圆形,数目多为 1个;包涵体着色较深,边沿界线清晰，与核膜或边沿化的染色质之间有一空白区间,内部呈均一致密的蓝紫色到紫红色。7.3结果可疑时,补充组织病理学诊断法或 PCR检测法进行结果确认。2 SC/T 7203.3-2007附录A(规范性附录)试剂配方A.1T-E染色液台盼蓝0.6g伊红Y(水溶性)0.2g苯酚0.5gNaCl0.5g甘油20 mL水80 mL室温贮存。3 20/O中华人民共和国水产行业标准对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第3部分：新鲜组织的T-E染色法SC/ T 7203.3--2007* **中国农业出版社出版（北京市朝阳区麦子店街18号楼）（邮政编码：100026网址：