SN_T 1197-2016油菜中转基因成分检测 普通PCR和实时荧光PCR方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1197—2016代替SN/T 1197-2003油菜中转基因成分检测普通PCR 和实时荧光 PCR 方法Detection of genetically modified ingredients in oilseed rape-Conventional and real-time PCR methods2016-12-12 发布2017-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局森蔚， SN/T 1197-—2016前 言本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本标准替代SN/T1197一2003《油菜籽中转基因成分定性PCR检测方法》。本标准与 SN/T1197一2003相比，主要技术性差异如下：修改了标准的中文名称和英文名称；增加了实时荧光PCR检测方法；一增加了品系特异性检测方法。一本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准主要起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：潘良文、李想、吕蓉、杨捷琳、刘月明、高琴。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T 1197—2003。 SN/T 1197—2016油菜中转基因成分检测普通PCR和实时荧光PCR方法1范围本标准规定了油菜及其加工产品中转基因成分筛选、基因特异性和品系特异性普通PCR 和实时荧光PCR检测方法。本标准适用于油菜及其加工产品中转基因成分筛选、基因特异性和品系特异性定性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1转基因transgene将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列，通过生物工程技术，使其在该物种中进行表达，以便使该物种获得新的品种特征。3.1.2实时荧光 PCR real-time polymerase chain reaction实时荧光聚合酶链式反应。是指在聚合酶链式反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，荧光信号的强弱直接反映模板数量。3.1.3内源基因endogenous gene在检测物种中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的基因。该基因可用于判定物种特异性。3.1.4外源基因exogenous gene利用生物工程技术转人的其他生物基因，使该生物品种表现新的生物学性状。3.1.5Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。1 SN/T 1197--20163.2缩略语BAR:草丁（铵）麟乙酰转移酶基因（phosphinothricin acetyltransferase gene)BARNASE:ribonuclease gene from Bacillus amyloliquefaciens，来源于解淀粉芽孢杆菌的核糖核酸酶基因BARSTAR: specific inhibitor of the barnase gene from Bacillus amyloliquefaciens ,来源于解淀粉芽孢杆菌的 BARNASE基因的特异抑制基因bp:base pair,碱基对BXN:nitrilase enzyme gene from Klebsiella pneumoniae subsp.Ozaenae，来源于肺炎克雷伯杆菌臭鼻亚种的腈水解酶基因CP4-EPSPS:5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase gene,5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因CruA：Cruciferin Agene，油菜种子储藏蛋白基因CTAB:cetyltrithylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵dATP:deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸dCTP:deoxycytidine triphosphate，脱氧胞苷三磷酸dGTP:deoxyguanosine triphosphate，脱氧鸟苷三磷酸DNA:deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸dNTP:deoxyribonucleoside triphosphate，脱氧核苷三磷酸dUTP:deoxyuridine triphosphate,脱氧尿苷三磷酸EDTA:ethylene diami