苹果及苹果制品中根皮苷的检测方法 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.020.99 B20 中华人民共和国国家标准 GB/T XXXXX—XXXX 苹果中根皮苷的检测方法 高效液相色谱法 Determination of phloridzin in apple High performance liquid chromatography （征求意见稿） XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施 中华人民共和国国家市场监督管理总局 发 中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 布 苹果中根皮苷的检测方法高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了苹果中根皮苷含量的检测方法 高效液相色谱法的范围、规范性引用文件、原理、试 剂与材料、仪器和设备、苹果中根皮苷含量的检测方法、分析结果的计算与表述、精密度。 本标准适用于苹果中根皮苷的定性和定量测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的 版本适用于本文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓 励根据本标准达成协议的各方研究是否可会用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新 版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性 与再现性的基本方法。 3 原理 苹果试样用 90%乙醇提取等样品前处理方法，然后经C18 色谱柱分离，二极管阵列检测器检测， 色谱峰保留时间定性，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 乙腈（C H N ）：色谱纯。 2 3 4.2 标准品:根皮苷标准品（C21H24O10 ）：CAS：60-81-1，纯度大于98.0% 4.3 根皮苷标准储备液（1.0 mg/mL）：准确称取根皮苷标准品25 mg （精确至0.1 mg ）于25 mL 容量 瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，配制成浓度为1.0 mg/mL 的标准储备液。放置于4 ℃冰箱避光保存， 有效期为一个月。 4.4 根皮苷标准曲线工作液：分别吸取根皮苷标准中间液（4.3.1 ）0.05 mL、0.1 mL、0.25 mL、0.5 mL、 1.0 mL、2.5 mL、5 mL 至10 mL 容量瓶中，用乙腈定容。该标准系列浓度分别为 5.0 μg/mL､10.0 μg/mL ､25.0 μg/mL､50 μg/mL､ 100 μg/mL､250 μg/mL ､500 μg/mL､1000 μg/mL。临用时配制。 GB/T XXXXX—XXXX 5 仪器和设备 5.1 0.45 µm 微孔水相滤膜，0.45 µm 针筒式有机相过滤器。 5.2 旋转蒸发仪。 6 分析步骤 6.1 试样制备 将苹果样品，用干净纱布轻轻将样品表面擦净，将其切碎，混合均匀，称取20.00 g 样品（精确到 0.001g ）加入90%乙醇水溶液100 mL，6000 r/min，匀浆3 min，再加入300 mL90%乙醇水溶液转移至 1L 圆底烧瓶中，放入梭形转子，轻轻摇晃使样品和溶剂混合均匀，调节磁力搅拌器使转子能够带动溶 液搅拌，80℃加热回流1h 后（保证回流速度达到1 滴/s ，如果未到达，适当提高1~2℃），冷却过滤， 45 ℃旋蒸，旋蒸至60 mL，转移至分液漏斗中，加80 mL 乙酸乙酯萃取两次，（如有乳化现象，通过4000 r/min ，离心2 min 进行破乳）合并两次的乙酸乙酯相于250 mL 圆底烧瓶中，旋转蒸发至干，每次采用 1.0 mL 色谱甲醇清洗圆底烧瓶3 次，全部转移至5 mL 容量瓶中，加色谱甲醇定容至刻度，过0.45 µm 针筒式有机相过滤器，即为试样液。 6.2 色谱测定 6.2.1 参考色谱条件 色谱柱：C18 柱，柱长250 mm × 4.6 mm，粒径5 µm，或具有同等性能