SNT 2521-2010单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2521—2010单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法Serotyping of Listeria monoc ytogenes2010-03-02 发布2010-09-16实施中华人民共和国0发布装整国家质量监督检验检疫总局数码防伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法SN/T 2521—2010中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www.spc. 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷* 字数 ９千字开本880×1230 1/16印张 0.52010年5月第一版　2010年5月第一次印刷印数 1--1 600*书号：155066·2-20857 SN/T 2521—2010前言本标准的附录 A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局。本标准主要起草人：曾静、魏海燕、张西萌、王金花、陈广全、张惠媛、饶红、付溥博、畅晓辉、张昕、汪琦、马旭。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。一 SN/T 2521—2010单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法1范围本标准规定了单核细胞增生李斯特氏菌的血清分型方法。本标准适用于对单核细胞增生李斯特氏菌进行血清分型，单核细胞增生李斯特氏菌的溯源可参照本方法。2规范性引用文件凡是注日期的引用文件,其随后所有下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用宇本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 4789.30食品卫生微生物学检验　单核细胞增生李斯特氏菌检验GB19489实验室　生物安全通用要求3设备和材料3.1台式离心机：1600g。3.2冰箱:4℃～6℃。3.3McFarland 浊度计。3.4加热器。3.5接种针。3.6试管:6 mmX50mm。3.7试管架:适用于 6 mm50 mm试管。移液器：适用于25 μL,，50 μL,l100 μL3.83.9恒温水浴：48℃。无菌载玻片。3.103.11生物安全柜。4培养基和试剂SIM动力琼脂：见第A.1章。4.14.2胰蛋白磷酸盐肉汤(TPB)：见第 A.2章。4.337%甲醛溶液。4.40.85%灭菌生理盐水：见第A.3章。4.5含0.5%甲醛生理盐水：见第A.4章。4.6 0抗血清。4.7 H抗血清。5方法提要待测菌株应是经鉴定确证为单核细胞增生李斯特氏菌的纯培养物，单核细胞增生李斯特氏菌的抗血清与李斯特属其他种之间存在交叉反应现象，所以错误鉴定的或不纯的培养物,在进行血清型鉴定时会得出错误的结果；H抗原，又称鞭毛抗原,H抗原位于细菌鞭毛上，在鉴定 H抗原时应使用有运动性1 SN/T 2521--2010的菌株；应先鉴定H抗原，后鉴定O抗原。单核细胞增生李斯特氏菌O抗原和H抗原的关系见表1。表 1单核细胞增生李斯特氏菌血清型抗原结构O-抗原H-抗原血清型AB1,I1/2aABC1/2bI,IBDI.Ⅱ1/2cAB3aI,IV3bI,IVABCI,IVBD3cABC4a(V),ИI,XABC4abV,VI,VI,IX, X4bABCV,VV,VIABC4cABC4d(V),VI,VIIABC4eV,V,(),(x)ABC7XI , XII6检验流程单核细胞增生李斯特氏菌血清分型流程见图1。待测菌株O抗原鉴定H抗原的鉴定穿刺接种EB半固体挑取菌苔边缘挑取菌苔中心培养基（24h～48h，25 ℃)接种TPB培养基接种TPB培养基35 ℃, 18 h~24 h25℃，培养18 h～24 h100℃，加热菌体细胞2h用含0.5%甲醛溶液处理菌体细胞1600g，30 min收集菌体25℃，保温4 h0.5%的甲醛生理盐水洗涤菌体细胞离心收集菌体（1600g，30min）1600g，30min收集菌体用0.5%的甲醛生理盐水洗涤菌体细胞调整细胞浓度≥3.0 MacFarland离心收集菌体，1600g，30min血清型鉴定调整细胞浓度≥3.0 MacFarland血清型鉴定图1单核细胞增生李斯特氏菌血清分型程序图2 SN/T 2521-—20107单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法7.1H抗原鉴定7.1.1将活化的待测菌株用接种针垂直穿刺接种于 SIM 动力培养基,25℃,培养 24 h～48 h。典型的单核细胞增生李斯特氏菌在EB半固体培养基上呈伞状生长。7.1.2挑取生长在 SIM动力培养基伞状菌苔边缘，接种于 TPB液体培养基，25℃,培养18 h～24 h。7.1.3在 TPB培养液中加人