新生大鼠心房肌细胞Kir3.1基因siRNA的筛选与鉴定的实验研究的开题报告.docxVIP

新生大鼠心房肌细胞Kir3.1基因siRNA的筛选与鉴定的实验研究的开题报告 一、研究背景 心房颤动（atrial fibrillation， AF）是一种常见的心律失常，其患病率随着年龄的增加而逐渐升高。研究表明，心跳过快和不规则导致的心房细胞电学重构是导致AF的重要原因之一。其中，离子通道的功能异常是导致心房细胞电学重构的重要原因之一。钾离子通道（Kir channels）是一类重要的心肌细胞电活动调节通道，其中Kir3.1通道是心房肌细胞中的重要代表。因此，通过siRNA技术抑制Kir3.1基因表达，能够有效地研究Kir3.1通道在心房肌细胞中的作用，进而探究其与AF的关系。 二、研究目的 本研究旨在筛选有效的siRNA序列，进而抑制新生大鼠心房肌细胞中的Kir3.1基因表达，通过观察细胞电生理学和发光素酶报告基因实验，评价抑制Kir3.1基因表达对心房肌细胞的影响，为深入探究Kir3.1通道在AF中的作用提供实验基础。 三、研究方法 1.构建Kir3.1基因siRNA干扰载体 选取三个靶点，设计并合成靶向Kir3.1基因的siRNA序列，将其连接至GV118载体中，转染至HEK293细胞中，通过Western blot验证siRNA的干扰效果，选取最有效的siRNA进行后续的实验研究。 2.筛选并鉴定新生大鼠心房肌细胞的Kir3.1基因siRNA 将有效的Kir3.1基因siRNA序列转染至新生大鼠心房肌细胞中，通过RT-qPCR验证Kir3.1基因表达的抑制效果，筛选出对Kir3.1基因表达抑制效果最好的siRNA序列，对筛选出的siRNA序列进行鉴定。 3.细胞电生理学实验 通过全细胞膜片钳记录心房肌细胞的离子流信号，观察抑制Kir3.1基因表达对心肌细胞膜电位及离子电流的影响，进一步探索Kir3.1通道在心房肌细胞中的作用。 4.发光素酶报告基因实验 利用pGL3-Kir3.1-3’UTR-luciferase报告质粒转染至心房肌细胞中，观察Kir3.1基因siRNA的干扰效果对Kir3.1-3’UTR区域的Luciferase活性的影响。 四、研究预期结果 通过实验研究，筛选出对新生大鼠心房肌细胞Kir3.1基因表达抑制效果最好的siRNA序列，并证实其具有可靠的干扰效果，从而为深入探究Kir3.1通道在AF中的作用提供了重要的实验基础。同时，通过细胞电生理学实验和发光素酶报告基因实验，进一步确定Kir3.1通道在心房肌细胞中的作用，为进一步研究AF的病因和治疗提供理论基础。