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代谢组学与中医证候研究 作为中医学独特的识病方法，该综合征是中医辩证法的基础和精髓，也是中医理论、法律和法规的桥梁和关键。 其实质是人体在疾病发生、发展过程中某一阶段病理生理状态的概括。 目前中医疾病证候辨证标准的建立方法为首先获取辨证信息, 然后通过统计学方法或专业知识判断等方法建立辨证标准, 最后检验辨证标准。 虽在研究方法上取得了一定的进展, 但缺乏实质性的突破。 而代谢组学以其系统性、动态性、综合性等特点与中医证候的整体观、恒动观、 辨证观思维模式有异曲同工之妙。 代谢组学以代谢物群体作为标志物来诊断疾病, 使得中医证候客观化、 科学化得到了方法学和技术上的支持。因此, 将代谢组学方法与技术引入中医证候本质研究具有重要的现实意义。 1 研究对象的特殊性 代谢组学是系统生物学的重要组成部分, 是“在新陈代谢的动态进程中, 系统研究代谢产物的变化规律, 揭示机体生命活动代谢本质”的一门科学。代谢组学强调把人体作为一个完整的系统来研究, 通过测定人体各种体液内代谢物的组成变化来认识和反映人体代谢网络在疾病和药物作用下的变化规律, 与中医学的整体观思维非常契合。 中医的证是对疾病某一阶段的特定病理生理过程的认识, 是机体内因和环境外因综合作用下的整体状态, 并随着病程发展而发生相应的变化。 而代谢组学的研究对象不是针对细胞、组织、体液某一时间点, 而是生命个体对外源性物质的刺激、 环境变化或遗传修饰所做出的所有代谢应答的全貌和动态变化过程, 两者的研究均具有恒动观思维。 证不仅对疾病中致病因素这一共性有深刻的认识, 更注重不同机体的反应性, 即注重辨证。 代谢组学也认识到这种个体差异, 在某一病证相关特定组分的共性加以分析、判断的同时, 又重视差异 (发现疾病的生物标志物) , 即代谢组学亦具有辨证性。利用代谢组学研究中医证候摆脱了西方还原论的束缚, 从整体层面分析中医证候的特点, 反映中医证候的内涵, 高通量及无歧视的成分分析能够快速解决中医证候主观对信息歧视的问题, 使中医证候本质客观化。 2 中医证候研究 中医治病讲求辨证论治, 而采用代谢组学技术研究不同证型、不同时间患者血液、体液中代谢物进而确定证型所对应的代谢组学特征和证候的物质基础, 使证得以科学化、客观化、定量化的描述, 不仅能提高中医药的临床治疗效果, 更能促进中医证候本质的研究。 2.1 基于临床疾病综合征的代谢研究 2.2 人类代谢的变化与人类代谢的变革 亚健康是人体处于健康与疾病之间的一种状态。 研究亚健康形成过程中机体代谢及其代谢物的变化, 探索潜在的生物标志物, 进而了解亚健康的发生机制, 有助于进行亚健康的早期诊断与干预。 3 中医证候学生物标记物和代谢轮廓 构建符合中医证候的病证结合动物模型, 采用代谢组学技术对其生物样本进行研究, 找到中医证候的生物标记物和代谢轮廓, 进而探究其作用机制, 有利于进一步阐明中医证候的本质并应用于临床诊疗。 3.1 ca、pls评分 简维雄等采用结扎大鼠冠状动脉左前降支复制急性心肌梗死心血瘀阻证模型, 并应用GS-MS技术结合PCA、PLS分析模型组大鼠心肌组织代谢产物发现, 大鼠急性心肌梗死心血瘀阻证与心肌组织代谢产物苹果酸、谷氨酸、酪氨酸等含量的改变密切相关。 心肌组织代谢产物谱显示急性心肌梗死心血瘀阻证代谢途径与缺氧后的糖代谢紊乱密切相关。这些发生变化的代谢物可以作为心血瘀阻证的潜在生物标志物进行深入研究。 3.2 中医证候研究 王勇等采用NMR及NOESY (Nuclear overhauser effect spectroscopy) 序列核磁共振技术和模式识别技术研究冠心病心肌缺血血瘀证小型猪血清代谢物谱显示, 相对于假手术组, 模型组血清中葡萄糖糖升高、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白降低, 血液黏滞度升高, 与中医对血瘀证“浓、黏、凝、滞”的描述相符。 可见, 通过对证候相关代谢谱的研究, 能够对中医证型进行相关规范化研究。 模型血清中内源性代谢物柠檬酸、γ-氨基丁酸、 乳酸等特定分子含量上升, 提示其可能成为冠心病临床诊断与治疗的靶标, 并为证候客观化研究提供新的方法与思路。王勇还利用CPMG (Carr-Purcell-Meiboom-Gill) 序列核磁共振技术研究去乳酸后慢性心肌缺血血瘀证小型猪血清差异代谢物的改变情况发现模型组血清中内源性代谢物苹果酸、谷氨酸、肌醇等含量上升, N-氧三甲胺等代谢物浓度下降。 这些代谢物的特征组合模式可能成为慢性心肌缺血血瘀证临床诊疗的参考指标, 并为研究证候的客观化提供新的思路。 3.3 pca检测l-血酸、d-葡萄糖酸、丙氨酸、戊二酸含量 潘秋等采用高脂饮食联合链脲佐菌素制备糖尿病脾气亏虚、 痰瘀互阻证大鼠模型, 并用GCMS和PCA技术分析第3 、6