HTRF技术原理和应用介绍.docxVIP

Cisbio-HTRF?技术原理和应用简介 HTRF?（均相时间分辨荧光，  HomogeneousTime-Resolved  Fluorescence  ）是一种用来检测纯液 相系统中待测物的技术。  该技术鉴于荧光共振能量转移  （FRET，Fluorescence  ResonanceEnergy Transfer  ）和时间分辨荧光（  TRF,Time-ResolvedFluorescence)  ）两大技术，开通的一款高通 量药物挑选利器。 荧光共振能量转移（FRET） 利用两种荧光基团的能量转移，这两种荧光基团分别称为能量供体（Donor）和能量受体 （Acceptor）。Donor被外来光源激发（比如氙灯或激光），假如它与Acceptor比较靠近，可 以将能量共振转移到在Acceptor上，使其遇到激发，发出特定波长的发射光。 将Donor和Acceptor分别与互相作用的两个生物分子联合，生物分子的联合能够将Donor和 Acceptor  拉到足够近的距离，产生能量转移，因为  Acceptor  的发射光来自能量转移，因此实验 中不需要将未联合与已联合的分子分开，即不需要清洗步骤。 时间分辨荧光（TRF） TRF利用稀土元素中镧系元素的独到性质，它们与一般荧光的主要差异是荧光的连续时间不一样。 一般荧光的半衰期为纳秒级。镧系元素的半衰期为毫秒级，  有6个数目级的差异。因此，在检测 室，TRF有一个时间延缓  ---50us  ，经过这个时间延缓，一般荧光的信号几乎为零，因此，  TRF 的背景特别低，反应样品实质状况。 ? HTRF的能量受体（技术创新点） ? Eu和Tb被永远地嵌 HTRF的能量供体是铕(Eu)和钛(Tb)的穴状化合物。在这个穴状化合物里， 合在一个笼子里，构造特别稳固，这个构造由教授发明的，并由此在 1987年获取了诺贝尔奖。 ? HTRF的能量受体 ? 它们的光学性质同样，分子量不一样，前者分子量为10KD， HTRF的能量受体也有二种，XL665和d2. 实质上就是别藻蓝蛋白（ APC）。我们将 APC的亚基偶联在一同，使其不可以解离，提升了稳固性， 后者分子量为1KD，在某些实验中有独到的优势。 ? HTRF的操作步骤 ? HTRF操作步骤特别简单，只要要将实验所需试剂加进去，而后孵育，检测即可。 HTRF?实验数据剖析 ? HTRF采纳了比值法来办理数据，能够去除溶液通透率、细胞大小、细胞数目不一样惹起的偏差。 ? HTRF应用范围 激酶活性检测生物标记物检测 受体第二信使检测胞外激酶活性检测 受体配体联合胞内激酶活性检测鉴于抗体的夹心法和竞争法检测 胞内信号分子检测 抗体检测 生物/免疫过程剖析 免疫检查点检测 抗体重链含量检测 GST含量测定 CD16联合 PD1/PD-L1 CTLA4 检测 /B7-1 抗体轻链含量测定 HIS含量测定 CD32结 LAG3/MHCII CD47/SIRP 合检测 alpha CHO宿主蛋白含量测定CD64 联合检测 CTLA4/B7-2 Adenosin A2A 互相作用剖析 蛋白修饰 实验室服务 蛋白-蛋白/ 蛋白-多肽 蛋白甲基化/ 蛋白乙酰化 蛋白-DNA/ 蛋白-RNA 蛋白泛素化/ 蛋白水解 ? HTRF技术优势： 1.操作简单，空板直接加样，加完即可检测，时间短（加样和孵育2h）！ 合适宝贵样本：整个实验系统只要20ul 均相检测：无需包被，免洗ELISA，省时省力 系统稳固：7天内可随时检测，信号基本不变 数据客观真切：比值办理可有效去除背景荧光，假阳性率和价阴性率低 高端检测，只要简单的酶标仪就能够轻松搞定！ ? HTRF检测的仪器 Cisbio与几乎全部的仪器供给商都成立了合作伙伴关系，下边是经过考证的仪器列表: