脐带间充质干细胞的分离、鉴定和培养条件的优化的中期报告.docxVIP

脐带间充质干细胞的分离、鉴定和培养条件的优化的中期报告 本研究旨在探讨脐带间充质干细胞（WHARTONS JELLY DERIVED MESENCHYMAL STEM CELLS，WJ-MSCs）的分离、鉴定和培养条件的优化。截至目前，已完成了中期报告。 一、脐带样本的获取与处理 我们从医院的产科手术室获取了12个新生儿的脐带样本，按照标准流程处理，得到了脐带间充质干细胞。 二、脐带间充质干细胞的分离和鉴定 1. 细胞分离：采用胶原酶消化法将脐带组织切割成小碎片，过筛除去大块组织后，用Dulbeccos Modified Eagle Medium（DMEM）培养基中含10%胎牛血清的培养液进行温和的胶原酶消化，离心沉淀，用DMEM培养基加10%胎牛血清（Fetal bovine serum，FBS）将细胞悬浮液计数后，进行细胞形态鉴定。 2. 细胞表面标记物的检测：采用流式细胞术进行表面标记物CD34、CD45、CD73、CD90和CD105的检测，结果表明本实验室分离的脐带间充质干细胞表面标记物符合国际上对WJ-MSCs鉴定的标准。 三、脐带间充质干细胞的培养条件的优化 1. 细胞培养基的优化：我们从克隆、增殖和分化的角度，对其进行了多种基础培养液的筛选，最终选出了DMEM/F12基础培养液作为适宜的培养基。 2. 培养条件的优化：我们调整了培养液中不同的生长因子浓度和细胞密度，