第二章预处理及固液分离技术.pptVIP

第五节 离心技术 第二十八页，共六十七页，2022年，8月28日 离心分离方法 （1）差速离心分离－生化工业中最常用分离方法 实际物系的特点、分离目的、分离程度 （目标产物和其它组分的性质及相互作用等） 选择适当的操作条件（离心转数和时间） 使料液的不同组分得到分级分离 第二十九页，共六十七页，2022年，8月28日 细胞破碎液 离心 600g,10min 沉降层/细胞核（4－6μm) 上清液 (细胞膜碎片、线粒体、溶菌体、核糖体、水溶性物质 离心 (10000g,10min) 沉降层 （细胞膜碎片、线粒体、溶菌酶） 上清液 （核糖体、水溶性物质） 离心（100000g，3h) 上清液(水溶性物质） 沉降层（核糖体） 细胞破碎液的差速离心分离 第三十页，共六十七页，2022年，8月28日 （2）区带离心－生化研究的重要分离手段 （差速区带离心和平衡区带离心） 在离心管中用某种低分子溶质（如蔗糖）调配好密度梯度（从大到小加入） 在密度梯度之上加待处理的料液 然后进行离心操作 区带离心法可用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离纯化，但处理量小，一般仅限于实验室水平。 第三十一页，共六十七页，2022年，8月28日 差速区带离心: 密度梯度最大的密度待分离的目标产物密度 得到纯化的各组分 在离心操作中 料液中各个组分在密度梯度中以不同的速度沉降 据沉降系数差别形成各自的区带 经过一定时间 分别汲取不同的区带 第三十二页，共六十七页，2022年，8月28日 平衡区带离心 平衡区带离心的密度梯度比差速离心的密度梯度大。 料液中高分子物质在与自身密度相等的溶剂密度处形成稳定的区带。 区带中的高分子物质浓度以该密度处浓度为中心，呈高斯分布。 离心的结果 第三十三页，共六十七页，2022年，8月28日 （3）等密度离心法 等密度离心的有效分离仅取决于粒子的密度差，与粒子的大小和形状无关，但是此二者决定着达到平衡的速度、时间和区带宽度。 第三十四页，共六十七页，2022年，8月28日 离心分离设备及处理能力 离心机是生物相关实验室及生物制品生产企业广泛使用的分离设备。 实验室用离心机以离心管式转子离心机为主，为间歇式。（一般为冷冻离心机） 工业用离心设备一般要求有较大的处理能力并连续操作。 常用的有管式和蝶式两大类。 第三十五页，共六十七页，2022年，8月28日 离心机处理能力（一定时间内处理多少料液量） Q=VgΣ Σ：具有面积的单位，称为离心沉降面积，是离心机结构和操作条件的函数。 L:离心管长 r2:离心机转筒内径 ω：旋转角速度＝2πN N：离心机转数（s-1) g L r 2 2 2 2 ω π Σ = 1） 管式离心机 第三十六页，共六十七页，2022年，8月28日 第三十七页，共六十七页，2022年，8月28日 2）碟片式离心机 处理能力Q=VgΣ Σ＝ 2πn(r13-r23)ω2 3gtan φ r1、r2分别为分离板的外径和内径，n为分离板数， φ为分离板与旋转轴的夹角. 第三十八页，共六十七页，2022年，8月28日 第三十九页，共六十七页，2022年，8月28日 大容量冷冻离心机 离心分离设备 第四十页，共六十七页，2022年，8月28日 细胞与发酵液分离的方法（5种） 重力沉降、 离心分离、 过滤 双水相萃取 泡沫分离法 第四十一页，共六十七页，2022年，8月28日 2.2重力沉降 【自学】 重力沉降设备体积庞大，分离效率低。 具有设备简单，制造容易，能耗低等优点，在食品、发酵，特别是环境工程中得到应用。 菌体或动植物细胞的重力沉降虽然简单易行， 因菌体细胞体积小，沉降速度很慢，不适于应用。 第四十二页，共六十七页，2022年，8月28日 2.3 离心沉降 离心沉降是科研与生产实践最广泛使用的非均相分离手段。 适用于菌体或细胞的回收或除去， 用于血球、细胞器、病毒及蛋白质分离， 应用于液液相分离。? 2.3.1离心沉降速度 重力g作用下的沉降速度 dP:粒径， ρS:颗粒密度， ρL：液体密度，μL：液体粘度 第四十三页，共六十七页，2022年，8月28日 离心力 Fc=r ?ω2 r: 粒子的离心半径，ω：旋转角速度，N：离心机转速（s-1) 离心沉降速度 旋转角速度ω=2πN 第四十四页，共六十七页，2022年，8月28日 2.3.2 沉降系数（S) 沉降系数 S ： 是溶剂物性的函数， 是溶质颗粒浓度的函数（成反比）， 是溶质相对分子量的函数（成正比） = S＝ 第四十五页，共六十七页