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流式细胞仪标准操作程序sop（各个项目测定） 1 2HLA-B27 3CD55CD59 4 5 6 7 8TIFN-γ/IL-4 9XL (流式细胞仪) 医院检验科 操作规程文件号： 200 年 月 日起实施 第1版 (共3页) 本规程每2年复审一次 复审日期： 年 月 日 复审人： 规程编写者： 审 批 者： 批准日期： 年 月 日 文件分发部门和／或个人 院档案室保管者： 检验科 主任： 检验科 实验室： 流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特) ： 双/三色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与白 细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞 仪上进行分析，从而得到淋巴细胞亚群的百分数。淋巴细胞表面抗原分布如下： T淋巴细胞：CD3+；B淋巴细胞：CD5+，CDl9+；辅助性T淋巴细胞：CD3+CD4+； 抑制性T淋巴细胞：CD3+CD8+；NK细胞：CD3-CDl6+56+等。根据淋巴细胞膜上CD分子表达的不同，流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞及其各种不同的亚群， 利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数。 检查对象生活饮食处于日常状态，空腹采血。 静脉采血 EDTA或肝素抗凝血 1．样本量至少1ml。 2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻的标本不能用。 99 3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×10/L之间。若10.0×10/L， 9样本需要稀释，用PBS稀释；若4.0×10/L，应分离单个核 细胞。 4．溶血样本不能用。 1：单克隆抗体 液体 1ML 2—8? 2：全血溶血试剂 液体 A：甲酸 液体 70ML 室温 B：碳酸钠等 液体 32ML 室温 C：多聚甲醛 液体 14ML 室温 3：鞘液 液体 20L 室温 4：清洗液 液体 5L 室温 5：荧光微球 液体 10ML 2-8? BEKAMANCOULTER产品，未开瓶的试剂于2-8?保存，可在有效期内保 持稳定，稀释的试剂于2-8?可稳定2周；每天校准一次：遇特殊情 况随时进行校准。 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra ： 1)按照要求，分别向已编好号的试管中加入20 ul单克隆抗体和同型对照 2)分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血。 3)混匀，避光，室温孵育20-30分钟 4)溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血) b. 使用COULTER Q—PREP制备系统 开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管 关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管 ---再进行下一个样品测定。 （*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体） 5)上机测样（可根据样本情况选择洗或不洗上样） 报告百分数（和绝对值） 精密度 批内五次重复CV2％ 灵敏度 500—1000个荧光素分子 百分数（绝对值）) CD3+ 60.8-75.4%(1141-1880) CD4+ 29.4-45.8%(478-1072) CD8+ 18.2-32.8%(393-742) NK 9.5-23.5% (175-567) Th/Ts 1.05-2.03 ，在肿瘤、免疫缺陷、病毒 感染，自身免疫性疾病、创伤、急性感染、多脏器功能衰竭、器官移植等具 有临床诊断、病情判断、治疗等价值。 临床常用Th／Ts比值来判断病人的免疫状况。 ：表示免疫功能亢进：见于自身免疫性疾病，如SLE、类风湿 性关节炎、自身免疫性溶血性贫血、重症肌无力以及HBsAg+乙肝等。 ：表示免疫功能下降：艾滋病、病毒感染、肿瘤病人、慢活肝 和活动性肝硬化、再生障碍性贫血、粒细胞减少患者。 ，所以在抗肿瘤和 防御疾病中起主要作用。NK活性减低主要见于各种恶性肿瘤、自身免疫性疾病、 病毒感染、应用免疫抑制剂，疲劳综合征病人等，NK活性随年龄增长而减退。 NK细胞也参与第二型超敏反应和移植物抗宿反应，白介素-2治疗后；外周血NK 细胞增加。 Protocol (流式细胞仪) 医院检验科 操作规程文件号： 200 年 月 日起实施 第1版 (共3页) 本规程每2年复审一次 复审日期： 年 月 日 复审人： 规程编写者： 审 批 者： 批准日期： 年 月 日 文件分发部门和／或个人 院档案室保管者： 检验科 主任： 检验科 实验室： 流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特) ： 双色直接免疫荧光法。将HLA-B27-FITC/B7-PE单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上相应的抗体结合，经过溶血、洗涤（和