单克隆抗体制备常见问题分析 .pdfVIP

单克隆抗体制备常见问题分析 一、前言 1975年，Kohler 和 Milstein 发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠 脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克 隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪 元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细 胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤。 虽然单抗技术已经非常成熟，但是由于其经济价值，仍然有很多人在从事这项 研究，而且其中也会遇到很多这样那样大问题。我本人就是其中一个，由于是第一 次做单抗，所以过程中遇到了很多困难，终于在前几天得到了几株阳性克隆。 鉴于此，我将单克隆抗体制备的整个过程贴出来，同时搜索了园子里面一些战 友的求助帖以及一些经典的应助帖，希望能对将要或是正在从事这项研究的战友们 有些帮助。 二、 动物的免疫 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的 McAb 至关重 要。一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原 的特性不同而定。 1. 颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很