DNA错配修复蛋白在结肠癌中的表达与其临床特征的关系 .pdfVIP

DNA 错配修复蛋白在结肠癌中的表达与其临床特征的关系 【摘要】目的：回顾性分析错配修复蛋白 MLH1 、MSH2、MSH6、PMS2 在II、III 期结肠癌中 的表达规律及临床特征。方法：选取我院病理科确诊的结肠癌手术切除标本158 例，所有患 者在术前均未接受过放化疗。行免疫组化检测MLH1、MSH2、MSH6、PMS2，分为MMR 缺 失组（dMMR 组）、MMR 稳定组（pMMR 组），分析两组患者在临床特征的差异。结果： 158 例结肠癌中，dMMR 患者30 例，pMMR 患者138 例，dMMR 组患者在发病年龄60 岁， 右半结肠、低分化癌的比例较pMMR 组患者高，差异有统计学意义（P0．05 ）；dMMR 组 患者，发生在女性患者、II 期较pMMN 组高，但差异无统计学意义（P0．05 ）。结论： dMMR 的结肠癌，常发生在右半结肠癌，发病年龄多小于60 岁，以低分化癌多见，为预测 结肠癌预后提供重要的参考依据。 【关键词】MMR；MSI；结肠癌 结直肠癌是目前常见消化道恶性肿瘤，是多种癌基因突变或抑癌基因失活累积导致基因组不 稳定的结果，其中错配修复功能缺陷引起微卫星不稳定是发生的一个重要机制。错配修复系 统具有识别和修复 DNA 合成期间的错配碱基的功能，通常由错配修复基因 MLH1 、MSH2、 MSH6 和 PMS2 编码的错配修复蛋白修正这类错误[1]。文献报道大约15％的散发性结直肠癌 显示MSI，其病因通常是hMLHl 基因启动子甲基化，导致错配修复蛋白不表达从而使DNA 复 制错误增加、微卫星不稳定而使肿瘤发生[2]。MMR 基因突变可导致相应修复蛋白表达缺失， 基因复制过程中的错误得不到纠正，最终导致微卫星不稳定的发生。本研究收集了我院158 例结肠癌根治术患者，用免疫组化法检测MLHl、MSH2、MSH6 和PMS2 蛋白的表达情况，探 讨DNA 错配修复（DNA mismatchrepair，MMR）与Ⅱ、Ⅲ期结肠癌患者临床特征的相关性。 一、资料与方法 1 入组标准 （1）经病理确诊为原发性结肠癌；（2 ）行结肠癌根治切除术，并依据第7 版美国癌症联合 委员会制定的结肠癌TNM 分期标准，分期均为Ⅱ~Ⅲ期；（3 ）手术前未行放化疗且未接受 其他抗肿瘤的治疗。 2 病例收集 收集我院病理科2016 年1 月-2018 年4 月确诊结肠癌的158 例患者，其中男性95 例，女性 63 例；年龄45~73 岁，平均（58.2±9.9 ）岁；Ⅱ期80 例，Ⅲ期78 例。 3 免疫组化法检测肿瘤组织中MLHl、MSH2、MSH6 和PMS2 蛋白的表达： 免疫组织化学染色采用全自动检测方法，所用一抗均购自丹麦Dako 公司，为即用型抗体 （即用型MLH1、MSH2、MSH6、PMS2 四种鼠抗人单克隆抗体）。按产品说明书要求进行操 作切片，常规脱蜡至水，经1mmol /L EDTA （pH 8.0）抗原修复液给予高压热修复。再以 H2O2 （30mmol/L ）孵育10 min，蒸馏水冲洗，PBS 浸泡5 min ；滴加兔血清工作液，孵育10 min 后冲洗；滴加一抗，37℃孵育2 h，PBS 冲洗3min X3 次；滴加二抗，孵育15 min，PBS 冲洗3 min×3 次；DAB 显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。以PBS 代替一抗作为阴性对 照，以正常大肠黏膜上皮表达情况作为阳性对照。 4 结果判定 所有结果经过两名病理医生判读 （盲法），MLHl、MSH2、MSH6 和PMS2 蛋白定位于细胞核， 呈黄色或棕黄色染色为表达（+ ），不着色为缺失（- ）。MLHl、MSH2、MSH6 和PMS2 蛋白 中任意一种不表达判定为MMR 缺失（dMMR ），而MLHl、MSH2、MSH6 和PMS2 蛋白均表 达则判定为MMR 稳定（pMMR）[3]。 5 统计学方法 应用SPSS18.0 统计软件进行数据分析，组间比较采用X 2 检验，以P0.05 为差异有统计学意 义。 二、结果 MMR 蛋白表达的情况和临床病理特征：158 例结肠癌患者，dMMR 组患者 30 例（19.0%）， pMMR 患者组28 例（81.0% ）。与pMMR 组患者比较，dMMR 患者常见于年龄60 岁、右半 结肠、低分化腺癌，差异有统计学意义（P0.05），与性别、肿瘤分期的差异无统计学意义 （P0.05）（表1）。 表1 158 例结肠癌患者的MMR 状态与临床病理特征关系 三、讨论 根据2015