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外周血细胞形态学检验及技巧 卫生部北京医院血液科 郑天林 卫生部临床检验中心 彭明婷 谷小林 陆红一． 血液学及血细胞形态学临床应用： 是临床血液病诊断与治疗及临床医学检验学的基础工作。 血细胞形态学适用于临床血液病诊断快速简捷的要求。 近年来由于血细胞学及超微结构、免疫学、细胞遗传学、融合基因、造血干细胞及 其细胞因子、骨髓造血微环境、基质细胞、树突状细胞、淋巴系细胞发生及其疾病表现，细胞增殖动力学与细胞凋亡以及骨髓组织病理学应用，推动了血液的临床与实验室的新知识迅 猛发展。 当前血液病不能单凭临床与形态学 作出 诊断，必须以临床和血细胞形态学为基础， 将免疫学、细胞遗传学及分子生物学新知识、新技术应用到血液学中，构成现代临床血液学 与分子生物学诊断技术，弥补形态学的经验性与主观性带来负面缺陷，才能提高血液病的诊 断与治疗水平。 进入 90 年代以来，国内外采用多学科联合技术综合诊断技术与方案： FAB-AL （ 1976 ）、 NCL （美国国家癌症研究所）对 FAB-AL 分型的补充 （ 1995 ）、 AL-MIC 分（类）型， MIC 及 MICM 分型（ 1985-1990 ）； FAB-CL 分型 （ 1989 ）、中国 CL 分型 （ 1997 ）； FAB-MDS 分型（ 1982 ）、 MIC 协作组对 FAB-MDS 分型提出 补充建议 （ 1987 ）； WHO 对造血系统 及髓系恶性 疾病和淋巴系恶性肿瘤 WHO 分类 （ 2000 ）； 血细胞形态学诊断技术正在进入显微 图象 软件时期： ○创造出许多多功能软件，如血细胞形态学、细胞化学染色、血液病诊断与鉴别诊断、 CL 诊断与治疗及教学系统多媒体软件等。 ○将显微镜与微机相连，应用储存、分类、检索软件，编辑、打印诊断报告，并可附多幅细胞 图象 。 二． 血细胞形态学基本概念 血细胞形态学作为临床血液病基础诊断： 观察血细胞形态和数量及其比例的变化来研究造血器官的结构和功能是血液学的重要组成部分，是诊断造血系统疾病最基本、最简便实用的检查方法，被临床普遍应用。 正常人的血液及造血器官中，各种血细胞的数量有一定的正常范围，不同血细胞及细胞发育的不同阶段有一定形态结构特点。 在造血系统疾病中，如果造血功能发生紊乱，就会从血细胞形态学的量变和质变中反映出来。 血细胞形态学检查应包括外周血和骨髓两部分组成，必须平行进行检查。因为，外周血的血细胞改变往往反映骨髓病变的信息，才有利于诊断。 三．血细胞染色 （一） 细胞染色机制 ：染色是将细胞经染色剂的物理及化学作用，使 其清楚 显示细胞各个组成部分，有利辨识细胞形态。 染色可分二个步骤： ．染料受相应物质吸附而附着于物质表面； ．固着作用，即染色粒子进入细胞内起化学反应（染料透过细胞膜的学说很多，尚无定论），与相应的物质形成溶解度很低的盐固着于细胞内而显色。染色剂皆有选择作用，其染色不是将细胞全部一齐着色，而只是将其中一部分染色，多余的被冲洗掉。目前多以吸附 学说（电力吸附、机械吸附、化学吸附）来解释。 一般染色方法由两种染色剂（酸性、碱性）组成，通常细胞核及浆 碱性粒体为 碱性，细胞浆为酸性。酸性染料可和带正电荷的（碱性）物质结合，这种物质称嗜酸性物质， 对酸性染料具有亲和力，因此嗜酸性粒细胞之颗粒本身为碱性物质；碱性染料可和带负电荷 的（酸性）物质相结合，这种物质称嗜碱性物质，对碱性染色粒具有亲和力，因此嗜碱性粒细胞之颗粒本身为酸性物质。另一种蛋白质在 pH6.4 呈等电状态 ，本身所含的正 / 负电荷相等，因此，既能和酸性染料又能和碱性染料结合，这种物质称中性物质，如中性粒细胞 之颗粒。 一般用 pH6.4 PBS 来稀释染液，使每次染色都在同一 pH 中进行，让细胞在恒定条件下着色，使染色效果趋于一致。 作者：198585912005-5-27 19:51 回复此发言 2 外周血细胞形态学检验及技巧 染液过碱时，蛋白质带有负电荷，对 次甲蓝有色 部分的正电荷吸附力强，因此染成的细胞一般着色较蓝，说明 pH 不适合。 染色与固定亦有极大关系，因细胞 经固定 后，其蛋白质的电力吸附（电附）可能有变化，有些固定液能将细胞某部分的电附加强，使其染色更为容易。因此，这种固定剂不仅有固定作用， 也有媒染作用 （ Mordunt ），染色极为容易。因此， 电附是 染色过程中最重要的作用。机械吸附在染色过程中也参与作用，如用苏木液和伊红染色，细胞核不是纯 蓝色，蓝色中略有红色，胞浆也不能尽为红色，红色中略有蓝色或 两者皆带些 紫色。这是因为伊红与胞核 虽无电附仍有 机械吸附，故也能染上少量红色，苏木液与胞浆 虽无电附但也有 机械吸附，因而胞浆略显蓝色。化学吸附（作用）在染色中应