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药品微生物检测风险控制与 案例分享 主要内容：l 微生物限度和无菌检查介绍 2020版中国药典主要变化l 风险因素与控制?人员与环境?无菌操作技术和无菌意识?方法适用性?菌种和培养基管理?设备与耗材?微生物数据偏差调查l 缺陷案例分析 一. 微生物限度和无菌检查介绍非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法：在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计 数。 控制菌检查法：在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。专一、专注、专业 一. 微生物限度和无菌检查介绍无菌检查法：系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器械、原料、 辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查 法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。存在/不存在检查，根据用于试验的培养基中是否有微生物生 长来判定样品的无菌性。对于任何一批产品而言，绝对无菌既无法保证也无法用试验来 证实，除非你不准备留下产品进行销售。质量保证要求，并不作为唯一的产品放行检查。 专一、专注、专业 药品无菌检查的局限性-采样由于没有从统计学的角度考虑采样，样品量少，使无菌检查试验检测污染物的能力受到限制，污染程度越轻，出现错误结果的可能性越大。专一、专注、专业 1%5%15%30%药品无菌检查的局限性-采样试验目的：不合格的可能性（%）试验批量：60 ，000支试验方法：按美国药典USP 71无菌检查法结论：含有少量微生物污染产品的批次也有可能“通过” 无菌检查；无菌药品生产的无菌过程控制至关重要。测试40支样品不合格的可能性测试20支样品不合格的可能性专一、专注、专业真实的不合格率100.0%99.9%99.8%96.1%33.1%87.2%64.2%18.2%6 药品无菌检查的局限性-培养条件l研究表明，药典规定的微生物培养条件并不是许多细菌和真菌的最适生长条 件。 许多临床上有意义的细菌生长在25～40 ℃之间。l用7个不同的培养基检查88株不同的细菌、38株酵母菌和54株霉菌，结果发 现，在32 ℃ 条件下对需氧菌和厌氧菌进行培养，胰酪胨大豆胨肉汤培养基和 硫乙醇酸盐流体培养基的效率低于亚硫酸钠－巯基乙酸盐肉汤；26℃培养真菌 和酵母菌10天后，胰酪胨大豆胨肉汤培养基的效率不及沙氏液体培养基、沙氏 葡萄糖琼脂、蛋白胨肝消化肉汤和蛋白胨肝消化琼脂。l胰酪胨大豆胨肉汤培养基不适用于对苛求微生物（如嗜血杆菌或奈瑟氏菌属） 的培养。l硫乙醇酸盐流体培养基也不适用于苛求厌氧菌 （如普雷沃氏菌属）的恢复培 养，培养基中需加入高铁血红素和维生素K1。专一、专注、专业 2020版中国药典主要变化-微生物限度检查1.菌液制备取黑曲霉的新鲜培养物加入3~5ml适量含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9% 无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至 无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白 胨缓冲液或含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。专一、专注、专业 2.薄膜过滤法总冲洗量一般不超过500ml，最多不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。专一、专注、专业 3.抗菌活性的去除或灭活供试液接种后， ……中和剂或灭活剂（表2)可用于消除干扰物的抑菌活性，最好在稀释液或培养基灭菌前加入。若使用中和剂或灭活 剂，试验中应设中和剂或灭活剂对照组，即取相应量含中和剂或灭活剂的稀释液替代供试品同试验组操作……专一、专注、专业 2020版中国药典主要变化-无菌检查1.培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的 脱水培养基或成品培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭 菌。制备好的培养基应保存在 2～25℃ 、避光的环境，若保存于 非密闭容器中，一般在 3 周内使用；若保存于密闭容器中，一 般可在一年内使用若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2～25℃ 、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。 专一、专注、专业 FTM：在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度 的1/ 53 ，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过 20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。专一、专注、专业 酵母浸出粉5.0g氯化钠2.5g无水葡萄糖5.0g琼脂0.75gL-胱氨酸0.5g水1000ml硫乙醇酸钠0.5g（或硫乙醇酸(0.3ml)硫乙醇酸盐流体培养基： 主要用于厌氧菌的培养 ， 也可用于需氧菌的培养。胰酪胨 15.0g 新配制的0.1%刃天青溶液 1.0ml专一、专注、专业 培养基各成分