Southern blot实验报告完整版.docVIP

PAGE1 / NUMPAGES5 医学分子生物学实验技术 实验报告 实验名称： Southern blot 一、实验目的 1．学习核酸杂交的基本过程和操作。 二、实验原理 1. Southern blot实验原理 根据DNA变性和复性发展的一种实验技术，就是分子杂交（hybridization)。指两条来源不同但具有同源性的核酸单链在一定条件下，根据碱基互补的原则缔结成双链分子。 Southern杂交是指一种利用标记的探针与膜上靶DNA片段进行杂交的技术，检测靶DNA片段中是否存在与探针同源的序列。其主要步骤包括： ⑴基因组DNA的限制性酶切； ⑵DNA酶切片段的电泳分离和转移； ⑶杂交及检测。 三、实验步骤 1、基因组DNA的限制性内切酶酶切 按如下方案进行基因组的酶切 HL60基因组DNA 10 mg 5 ul 10×Buffer E 2 ul EcoR I（10 u/ml） 2 ul ddH20 11ul 总体积 20 ul 37℃保温1.5小时。 2、电泳分离 2.1保温期间，浇一块凝胶板：称0.6g琼脂糖加60ml1xTAE，微波炉低火加热1分钟，