青岛文昌鱼ERK5,p38抗体的制备及体内蛋白表达的初步研究的中期报告.docxVIP

青岛文昌鱼ERK5,p38抗体的制备及体内蛋白表达的初步研究的中期报告 该实验的中期报告主要介绍了青岛文昌鱼ERK5和p38两种抗体的制备过程以及其体内蛋白表达的初步研究结果。以下为报告中的具体内容： 一、 青岛文昌鱼ERK5抗体制备 1. ERK5基因克隆: 首先从青岛文昌鱼组织中提取总RNA，并逆转录为cDNA。根据GenBank中公布的青岛文昌鱼ERK5基因序列，设计特异引物在PCR反应中扩增出ERK5基因全长。经酶切和连接操作，将ERK5基因克隆至表达载体中。 2. 抗原制备：以大肠杆菌Bl21(DE3)为宿主菌表达融合蛋白，包括青岛文昌鱼ERK5的C端和GST（谷氨酸-S-转移酶）标签。将得到的融合蛋白纯化，用于免疫小鼠制备抗体。 3. 抗体制备：采用小鼠免疫法制备ERK5抗体，首先将得到的纯化融合蛋白合成免疫物，然后注射到小鼠体内，免疫小鼠6周。采用ELISA和Western blotting等检测法鉴定抗体的效价和特异性。该过程正在进行中。 二、 青岛文昌鱼p38抗体制备 1. p38基因克隆：跟ERK5的克隆方法类似，从青岛文昌鱼中提取总RNA，逆转录合成cDNA，利用特异引物扩增出p38基因全长。将基因克隆至表达载体中。 2. 抗原制备：以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌表达针对p38的C端肽段和GST标签的融合蛋白。将得到的融合蛋白纯化，用于免疫小鼠制备抗体。