若干钙调控蛋白在小鼠ES细胞衍生神经元内质网钙储存及神经发生中的作用的中期报告.docxVIP

若干钙调控蛋白在小鼠ES细胞衍生神经元内质网钙储存及神经发生中的作用的中期报告 背景 Ca2+是细胞内重要的信号分子，在神经元中具有重要的功能，如触发突触传递、神经元内亚细胞结构的调节、参与神经元发生和走向等。在细胞中，Ca2+的浓度可通过整合性通道和细胞内储存器控制。内质网（ER）是细胞内最大的储存器，它在细胞内储存了大量的Ca2+，并能动态调节细胞内Ca2+的水平。ER内膜上的钙调控蛋白（CRPs）是调节ER钙平衡的主要分子，包括CALR、CANX、SERCA、IP3R和RyR等，它们能够调节Ca2+的流动和储存，从而影响神经元的发生和功能。 研究目的 本研究旨在探讨若干CRPs在小鼠ES细胞衍生神经元内质网钙储存及神经发生中的作用。 实验设计与方法 1. 小鼠ES细胞诱导神经元分化： 使用小鼠ES细胞，通过添加不同的神经分化因子和培养条件，诱导ES细胞向神经元分化。 2. 细胞培养和转染： 将分化出来的神经元培养，使用CRISPR/Cas9技术对CRPs进行敲除或过表达，检测其在神经元中的表达情况。 3. 钙成像： 在转染后的神经元中加入钙感染剂，利用共聚焦显微镜观察其内质网钙平衡的变化。 4. 神经元功能检测： 使用膜片钳技术记录神经元的神经电活动，检测CRPs对神经元电活动的影响。 结果 1. 敲除CALR、CANX和SERCA等CRPs显著影响神经元的分化和成熟。过表达这些CRPs则提高了神经元的分化。 2. CRPs的不同表达水平影响神经元内质网钙平衡，过表达CALR和SERCA能够显著提高Ca2+的储存量和内测光反应，而过表达IP3R and RyR则增加Ca2+的泄漏量。 3. CALR、CANX、SERCA、IP3R和RyR对神经元网络活动和电活动的控制作用均不同。CALR、CANX和SERCA显著提高了神经元膜电位的稳定性和神经元放电的频率，而IP3R和RyR则抑制神经元的放电活动。 结论 本研究证明了在小鼠ES细胞衍生神经元中，若干CRPs对神经元内质网钙平衡和神经元的分化、成熟、网络活动和电活动等方面具有不同的调控作用。这些发现有助于我们深入了解CRPs对神经元发生和功能的影响，为神经元疾病治疗提供新的思路和方法。