中药十八反中附子与浙贝母的配伍研究.docxVIP

中药十八反中附子与浙贝母的配伍研究 18世纪的回族是最有争议的理论课题。其中认为乌头反贝母。两药合用一直视为配伍禁忌。但是乌头、贝母合用产生相互作用的机制并不清楚。薄层色谱法作为药物化学成分检验的重要方法之一。目前却未见从薄层色谱检查化学成分变化的角度研究乌头、贝母配伍禁忌机制的报道。本研究通过应用薄层色谱法比较乌头、贝母合煎与单煎化学成分的变化, 为乌头、贝母相互作用的机制提供实验依据。 1 仪器和试药 硅胶G为青岛海洋化工集团干燥厂产品;试剂均为分析纯。紫外分析仪为上海京科实业公司生产。制附子、浙贝母购于西安饮片厂。 2 试验溶液的制备 2.1 干溶液的制备 2.1.1 小麦粉 称取浙贝母10g, 浸泡30min, 煎煮30min, 倒出煎煮液, 残渣加水再煎20min, 合并两次煎煮液, 煎煮液标记为A 。 2.1.2 制备浙贝母 称取附子、浙贝母各10g, 附子加入开水先煎30min, 再加入浸泡30 min的浙贝母, 合煎30mn, 倒出合煎液, 残渣加水煎20min, 合并煎煮液, 煎煮液标记为B。 2.1.3 单次附子溶液的制备 称取制附子10g, 加人开水煎煮60min, 倒出煎煮液, 残渣加水再煎20min, 合并两次煎煮液, 煎煮液标记为C。 2.2 甲醇的提取 将上述制备好的水煎液A、B、C分别依次用石油醚 (30-60℃) 、乙醚、正丁醇萃取各2次, 每次30ml, 分别合并萃取液, 水浴蒸干, 各用甲醇2ml使溶解, 得样品甲醇石油醚样品:A1、B1、C1;乙醚样品:A2、B2、C2;正丁醇样品:A3、B3、C3。 3 薄分析 3.1 红色论c 分别吸取三组样品:石油醚萃取液样品 (A1、B1、C1) ;乙醚萃取液样品 (A2、B2、C2) ;正丁醇萃取液样品 (A3、B3、C3) 各10μl, 点于三块硅胶板上, 顺序从左到右, 点样顺序依次为浙贝母单煎 (A) , 合煎 (B) , 附子单煎 (C) , 分别用石油醚-乙酸乙酯 (1∶1) 、石油醚-乙酸乙酯 (1∶1, 加少量二乙胺) 、正丁醇-乙酸乙酯 -水 (4∶1∶5, 上层) 展开, 取出晾干后置紫外灯下观察, 分别喷10%硫酸乙醇在160℃烘3min, 日光、紫外灯下观察, 喷稀碘化铋钾日光下显红色斑点。 3.2 同一羧甲基纤维素纳为粘合剂的双环[3.2.4]分析 照薄层色谱法 (《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ B) 试验, 吸取上述A3、B3、C3供试品溶液各10μl分别点于同一羧甲基纤维素纳为粘合剂的硅胶G薄层板上, 以正丁醇-乙酸乙酯 -水 (4∶1∶5, 上层) 为展开剂, 展开, 展距大于18cm, 取出, 晾干, 喷10%硫酸乙醇在160℃烘3min, 日光、紫外光灯 (300nm, 365nm) 下检视, 喷稀碘化铋钾日光下检视。图谱如下: 4 合监单次论治 经过5个不同批次的药材多次重复实验, 薄层色谱显示合煎液色谱明显较单煎液不同, 有新的斑点出现。在重新展的薄层板上观察上述10%硫酸乙醇显色的两个日光斑点, 喷稀碘化铋钾日光下显红色斑点, 重复性良好。 5 合充硫酸乙醇的用量 5.1 对于中药“十八反”配伍研究主要集中在其配伍后使附子的有效成分乌头碱、次乌头碱的煎出含量变化上及对机体细胞的影响上面, 没有人对其是否由成分变化作深入的研究, 此次薄层分析其化学成分的变化初步探讨了合煎其化学成分是否会发生变化, 色谱图给与明确肯定的回答。 5.2 薄层板喷 10%硫酸乙醇160℃小心加热3min斑点日光显色明显, 不过CMC-Na容易碳化。 5.3 用10%硫酸乙醇显色的两个日光斑点, 喷稀碘化铋钾日光下显红色斑点, 这两个成分可能为生物碱。 5.4从 (紫外300nm) 图谱上的各斑点的面积和颜色深浅可以看出两药配伍后好多成分溶出度增加。 5.5制附子和浙贝母配伍后色谱显示成分变化, 到底是新成分还是原来很微量的单煎溶不出或溶出很少根本无法鉴别出的成分配伍后溶出度增加所致还有待进一步更深层次的研究。