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2型糖尿病大血管病变动物模型的制备 到目前为止，糖尿病的病因和发病机制尚不完全清楚，d及其并发症的预防和治疗措施也不完善。建立理想的动物模型对深入研究d及其并发症及其并发症非常重要。本研究采用给Wistar大鼠灌胃改良的脂肪乳, 辅以尾静脉快速注射小剂量的链脲佐菌素, 在短时间内成功制备了以胰岛素抵抗为特征的2型糖尿病合并大血管病变的动物模型。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 scxk-pcr实验动物 SPF级雄性Wistar大鼠, 体重240g±20g, 由中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心提供, 许可证号SCXK津2005-0001。 1.1.2 脂肪乳的配制 猪油占20g, 甲基硫氧嘧啶1g, 胆固醇8g, 谷氨酸钠1g, 蔗糖5g, 果糖5g, 吐温-80 20ml, 丙二醇30ml, 加水定容至100ml, 配成脂肪乳。 1.1.3 试剂与检测仪器 短效胰岛素, 上海第一生化药业公司;链脲佐菌素 (streptozotocin, STZ) , Sigma公司产品;胰岛素放射免疫试剂盒, 九鼎公司提供;稳豪型血糖试纸, 强生 (上海) 医疗器材有限公司产品;大鼠内皮素 (ET-1) 放射免疫分析药盒, 北京市福瑞生物工程公司提供;游离脂肪酸 (FFAs) 测试盒, 南京建成生物工程研究所提供;总胆固醇 (TC) 、甘油三酯 (TG) 、低密度脂蛋白 (LDL-c) 、高密度脂蛋白 (HDL-c) 检测试剂盒, 中生北控生物科技股份有限公司提供;NO测试药盒, 南京聚力生物医学工程研究所提供, 批号010802。 1.1.4 仪器、试药与仪器 DPCR-GAMMA-C2放射免疫计数器, 九鼎公司制造;ONE Touch UItra血糖仪, 美国强生公司生产;放免r计量仪 (SN-695B型) , 上海核所日环光电仪器有限公司生产;LKBNOVA Ⅳ型超薄切片机 (瑞典) ;JEM100C×Ⅱ型透射电子显微镜 (日本) ;光学显微镜 (日本Olympus) ;721分光光度计, 上海第三分析仪器厂制造;德国CR411低温低速大容量离心机, JOUAN公司制造;LD5-2A, 北京医用离心机厂制造;AEL-200型电子分析天平, LIBROR公司制造;台式电子天平, 美国双杰兄弟集团有限公司制造。 1.2 实验方法 1.2.1 血糖检测及输注速率 实验分组:取Wistar大鼠40只, 随机分为正常组和高脂组, 每组20只。正常组每天灌胃普通饮用水, 高脂组灌胃脂肪乳, 共21d。 正糖钳实验方法:本方法为在原有正糖钳技术的基础上加以修改而成。动物禁食不禁水12h, 称重后腹腔注射异戊巴比妥钠25mg·kg-1麻醉, 仰卧固定, 将颈部皮肤剪开, 分离双侧颈静脉, 结扎远心端, 向近心端插入0.08cm硅化胶管, 结扎固定。从两侧颈静脉同时输注10%葡萄糖和1 IU·ml-1胰岛素溶液 (恒速) , 每隔10min尾静脉取血测血糖值, 不断调整葡萄糖输注速度使血糖值达稳态。记录稳态下连续60min的葡萄糖输注速率 (GIR) 。取稳态下6次血糖值的平均值作为稳态血糖, 取稳态下6次葡萄糖输注速率 (GIR) 的平均值作为稳态下的GIR。 胰岛素敏感指数 (ISI) 的测定:采用李光伟计算方以空腹血糖与空腹胰岛素乘积倒数的自然对数来表示, 即ISI=Ln 1/ (空腹血糖×空腹胰岛素) 。 1.2.2 游离脂肪酸和含血率 Wistar大鼠, 雄性, 体重240g±20g, 每日灌胃自制的脂肪乳1ml/100g, 灌胃3周后, 眶静脉取血, 离心血清, 放免法检测血清胰岛素 (Ins) , 比色法检测游离脂肪酸 (FFA) , 尾静脉取血, 强生血糖仪检测血糖。正糖钳实验方法结合胰岛素敏感指数判定胰岛素抗性, 挑选胰岛素敏感指数下降的肥胖大鼠, 空腹6h, 尾静脉快速注射STZ30mg/kg, 1周后取尾静脉血用强生血糖仪检测血糖高于11.1mmol/L的大鼠作为T2DM模型大鼠, 同时测定血脂 (TC、TG、LDL-c、HDL-c) 、血浆内皮素 (ET-1) 、一氧化氮 (NO) 的含量, 杀检实验动物作主动脉病理观察。 1.2.3 透射电镜观察 光镜观察:切取主动脉顶端5mm, 10%甲醛溶液固定24h, 常规石蜡切片4μm, HE染色;透射电镜观察:取出整个胸主动脉, 在其主动脉弓处取1块全层主动脉壁, 再将标本切成1mm×1mm×1mm的小块, 放入4℃装有2%戊二醛的青霉素小瓶中固定过夜, 行常规电镜包埋和超簿切片, 用H-300型透射电镜观察病理变化, 每组随机取3份主动脉标本。 1.3 模型评价指标 1.3.1 血糖值 空腹血糖, FBG≥11.1mmol/L。 1.3.2 血脂 游离脂肪酸、