应用酵母双杂交技术筛选直藻MBP相互作用蛋白的中期报告.docxVIP

应用酵母双杂交技术筛选直藻MBP相互作用蛋白的中期报告 本次实验旨在利用酵母双杂交技术筛选直藻（Thalassiosira pseudonana）中MBP（maltose-binding protein）相互作用蛋白。 首先，从直藻中提取总RNA，利用逆转录酶将其转录为cDNA。将得到的cDNA插入到双杂交载体pGBKT7-MBP中，构建出pGBKT7-MBP-cDNA文库。然后将构建好的文库与pGADT7-MBP进行转化，将构建出的双杂交酵母菌株进行筛选。 通过酵母菌落PCR对转化后的酵母菌株进行检测，结果显示插入率约为80%。进一步筛选正交互作的酵母菌株，利用X-α-gal和Aureobasidin A两种筛选方法进行筛选，结果表明仅有极少数菌株呈现两种筛选方法均为阳性。 随后，对阳性菌株进行扩增，提取质粒DNA进行测序及比对分析，初步鉴定出可能与MBP相互作用的蛋白。要进一步验证这些蛋白的相互作用，可以进行蛋白质相互作用实验，如GST pull-down实验、Co-IP实验等，以及进一步鉴定对MBP功能的调控作用。 综上所述，我们通过酵母双杂交技术筛选出可能与直藻MBP相互作用的蛋白，为进一步研究直藻MBP的功能及作用机制提供了一定的基础。