尿激酶介导的肿瘤靶向性rhTNF-a融合蛋白纯化及生物活性研究的中期报告.docxVIP

尿激酶介导的肿瘤靶向性rhTNF-a融合蛋白纯化及生物活性研究的中期报告 简介： 本文旨在介绍以尿激酶为介导物的肿瘤靶向性rhTNF-a融合蛋白的纯化及生物活性研究中期报告。该蛋白由人重组肿瘤坏死因子-α（rhTNF-α）和尿激酶融合而成，具有较强的肿瘤细胞杀伤作用，并能够在目标细胞附近积累，从而减轻致死剂量对正常组织的毒性。 材料与方法： 本研究采用重组DNA技术构建了包含rhTNF-α和尿激酶序列的融合基因，并在表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)中表达。分别采用离子交换层析（IEC）和凝胶排阻层析（SEC）纯化蛋白，并用Western blot检测其纯化程度。通过MTT法和流式细胞术测定融合蛋白在人肺癌A549细胞系中的生物活性。 结果： 经IEC和SEC层析，获得了高纯度（95%）的融合蛋白。Western blot结果证实了蛋白的纯化程度。MTT实验表明，融合蛋白能够显著杀伤A549肿瘤细胞，并呈现浓度依赖性。流式细胞术进一步证实了融合蛋白的肿瘤细胞靶向性。 结论： 以尿激酶为介导物构建的肿瘤靶向性rhTNF-α融合蛋白可以通过IEC和SEC纯化得到高纯度的产物，并具有良好的肿瘤细胞杀伤作用和靶向性。这为该蛋白的进一步应用提供了实验依据。