产肠毒素大肠杆菌987P菌毛FasA亚单位的原核表达、纯化及免疫原性分析的中期报告.docxVIP

产肠毒素大肠杆菌987P菌毛FasA亚单位的原核表达、纯化及免疫原性分析的中期报告 首先进行了大肠杆菌987P菌株的培养、扩增和质粒构建。进行了PCR扩增和酶切后，将fasA基因插入到pET28a(+)载体中，构建了pET28a-FasA质粒。 接着进行了pET28a-FasA质粒的转化和重组表达。将质粒转化到BL21(DE3)宿主菌中，加入IPTG后得到重组表达蛋白。通过SDS和Western blot检测，得到了表达的fasA蛋白。 然后进行了fasA蛋白的纯化和检测。利用HisTrap HP柱进行His标签的亲和纯化，得到了纯化的fasA蛋白。通过Western blot和质谱分析检测了纯化后的蛋白质。 最后进行了fasA蛋白的免疫原性分析。利用ELISA方法检测了纯化后的fasA蛋白的抗原性，可以与抗987P抗体特异性结合。同时进行了小鼠免疫试验，初步验证了FasA亚单位的免疫原性。 本次实验结果表明，成功进行了产肠毒素大肠杆菌987P菌毛FasA亚单位的表达、纯化和免疫性检测，为相关疫苗研发提供了可靠的基础。