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结核病分子生物学诊断 统计今年我院住院患者179例，分析涂片、培养和TB-RNA检测报告，结果如下： 患者类型 例数 TB-RNA 阳性例数 阳性率 涂片阳性 27 23 85.2% 涂片阴性 142 41 28.9% 培养阳性 68 62 91.1% 培养阴性 111 2 1.8% 我院涂片、培养阳性率分别为：15.1%和37.9%；TB-RNA的总阳性率为35.8%。 本文档共51页；当前第31页；编辑于星期二\7点28分 结核病分子生物学诊断 三、EasyNAT TB-DNA检测（恒温扩增法） 原理：将病原体DNA扩增、核酸杂交和核酸试纸条检测三种技术有机地融为一体，在恒温扩增反应中加入两对TB特异性引物、一对特异性探针，同时 一次性完成TB DNA的扩增及杂交 过程，然后用一次性核酸检测装 置进行定性诊断。 检测目标片段:目标为结核分枝杆菌 特异性IS6110片段。 本文档共51页；当前第32页；编辑于星期二\7点28分 结核病分子生物学诊断 操作步骤 本文档共51页；当前第33页；编辑于星期二\7点28分 结核病分子生物学诊断 2015年6月，我科参加CTCTC“EasyNAT?结核分枝杆菌核酸检测试剂盒现场应用评估”项目,结果如下： 患者类型 例数 EasyNAT TB-DNA检测 阳性率 % 阳性 阴性 涂片阳性 7 7 0 100.0 涂片阴性 43 2 41 4.7 培养阳性 10 9 1* 90.0 培养阴性 40 0 40 0.0 注*：1例培养阳性最终鉴定为非结核分枝杆菌 本文档共51页；当前第34页；编辑于星期二\7点28分 结核病分子生物学诊断 四、Gen-Xpert MTB/RIF 进行标本处理、实时PCR和利福平耐药性检测的完整平台 痰标本可以直接放入模块中，而无需与任何试剂进行混合处理 GeneXpert 设备可进行标本液化、去污染、富集、DNA提取、 rpoB实时扩增、应用分子灯塔检测耐药相关的突变 容易使用，不需要进行分子生物学培训 操作完全自动化， 使用起来既容易又安全。 本文档共51页；当前第35页；编辑于星期二\7点28分 结核病分子生物学诊断 Xpert MTB/RIF与PCR TB-DNA检测的比较： 阳性符合率＝99.03％，阴性符合率＝92.61％，总符合率＝95.31％ Gen-Xpert PCR TB-DNA 合计 阳性 阴性 阳 性 204 21 225 阴 性 2 263 265 合 计 206 284 490 本文档共51页；当前第36页；编辑于星期二\7点28分 适宜技术应对结核感染详解演示文稿 本文档共51页；当前第1页；编辑于星期二\7点28分 优选适宜技术应对结核感染 本文档共51页；当前第2页；编辑于星期二\7点28分 背景—结核病流行现状 全球有三分之一人口（20亿）感染了结核杆菌 我国现患肺结核病人达500万，占全球病人总数的1/4 本文档共51页；当前第3页；编辑于星期二\7点28分 背景—结核病感染、传播、发病过程 潜伏感染染 肺病或其他疾病 潜伏感染 复发 细菌在人体复制 播散Disseminates 发作Onset 康复Recovery 时间表Time 诊断Diagnosis 治疗Treatment 痊愈 ≥ 2 个月（months） 本文档共51页；当前第4页；编辑于星期二\7点28分 背景—当前结核病的研究 新型抗结核药物(50%) 新型快速诊断技术(40%) 新型结核疫苗(10%) JID 2012:205 (Suppl 2), S147. 本文档共51页；当前第5页；编辑于星期二\7点28分 背景—结核分枝杆菌基础 结核分枝杆菌（M. tuberculosis）简称为结核杆菌（tubercle bacilli）。早在1882年，德国细菌学家柯赫（Robert Koch）就已证明结核分枝杆菌是结核病的病原菌。本菌可侵犯全身各组织器官，但以肺部感染最多见。 在微生物分类中，结核分枝杆菌属于放线菌门、放线菌纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝杆菌属 分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆菌是人类主要的致病菌 本文档共51页；当前第6页；编辑于星期二\7点28分 背景—结核分枝杆菌基础 （1）结核杆菌可经多途径感染，由呼吸道、消化道和破损皮肤侵入机体，最常见为经呼吸道感染引起肺结核。 （2）结核杆菌无内毒素和外毒素，也不产生侵袭性酶，其致病性主要与其细胞壁内含大量脂质有关。主要包括： ①磷脂：可刺激单核细胞增生，与结核结节和干酪样坏死形成有关 ②分枝菌酸：与抗酸染色性有关 ③索状因子：可破坏细胞线粒体膜，与慢性肉芽肿形成有关 ④硫酸脑苷